[發(fā)明專利]一種單分散強磁性免疫納米微球及其制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610392204.3
• 申請日: 2016-06-03
• 公開（公告）號: CN105869813B
• 公開（公告）日: 2018-04-20
• 發(fā)明（設計）人: 楊磊
• 申請（專利權）人: 杭州卓立納米科技有限公司
• 主分類號: H01F1/01
• 分類號: H01F1/01;H01F41/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，所述單分散強磁性免疫納米微球的粒徑為5nm-5um,其特征在于，包括以下步驟：

步驟一：

S1、取濃度均為0.1～3mol/L的Fe3+的鹽溶液和Fe2+的鹽溶液，按體積比為1：1～10:1混合，取混合液10-100mL，加入5-500mL含有0.1％-10％乳化劑的水溶液中，充分混合均勻，得到混合液1；

S2、在混合液1中加入20％-80％的聚乙二醇-6000水溶液20-100mL，得到混合液2；

S3、將混合液2加熱至20～50℃，同時緩慢滴加濃度為20％～75％的氨水稀釋液0.1～0.5毫升，保持溫度持續(xù)反應1～3小時，得到顆粒1；

S4、分別用無水乙醇和超純水各清洗3次顆粒1，將顆粒1進行磁分離技術，在65℃的溫度下干燥2小時，即得到了四氧化三鐵納米顆粒；

步驟二：

S1、將所述四氧化三鐵納米顆粒分散在含有1％-10％十二烷基苯磺酸鈉水溶液中，再加入20-200mL濃度為20％-80％的醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液3；

S2、在混合液3中緩慢滴加5～30毫升濃度為0.1～1mol/l的四乙氧基硅烷溶液，反應1～10小時后再次加入濃度為0.1～0.5mol/l的氨水溶液調(diào)節(jié)PH值到8～12，得到混合液4；

S3、將混合液4繼續(xù)加熱到20～70℃持續(xù)反應3～5小時，反應結束后，得到顆粒2；

S4、將顆粒2進行磁分離技術出表面經(jīng)過硅羥基修飾的顆粒，用超純水清洗3次，在65℃真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散硅羥基磁性納米微球；

步驟三：

S1、將單分散硅羥基磁性納米微球分散在濃度為50～500毫升20％-80％的的乙醇溶液中，充分混合均勻，得到混合液5；

S2、在混合液5中加入10～100微升3-氨丙基三乙氧基硅烷，使其在25～60℃的溫度下反應1～10小時，反應結束后，得到顆粒3；

S3、將顆粒3進行磁分離技術，用75％的乙醇溶液清洗3次，在65℃真空環(huán)境下干燥2小時，即得到單分散氨基化磁性納米微球；

步驟四：

S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在0.1-10毫升PBS溶液中，加入0.1-10毫升質(zhì)量分數(shù)為10％的戊二醛溶液，充分混合均勻，得到混合液8，讓混合液8持續(xù)反應1～3小時，即可得顆粒6；

S2、將顆粒6再次分散在0.1-10毫升PBS溶液中，加入1～100微升待檢測物的相應抗體，進行孵育1-3小時，得到顆粒7；

S3、將顆粒7用PBS清洗2次后，加入到甘氨酸溶液中，使其混合反應，得到顆粒8，將顆粒8用PBS清洗2次后，再經(jīng)過磁分離技術，既得到單分散強磁性免疫納米微球。

2.根據(jù)權利要求1所述的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述步驟四更換為以下步驟：

S1、將單分散氨基化磁性納米微球分散在1～10毫升濃度為0.1～3mol/L的丁二酸酐溶液中，充分混合均勻，得到混合液6，使混合液6在通氮的條件下持續(xù)反應1～10小時，得到顆粒4，使顆粒4經(jīng)過磁分離技術，待顆粒4完全吸附后，將含有顆粒4的混合液6的上清液去除；

S2、將上述顆粒4分散在1～10毫升濃度為0.1～1mol/L的嗎啉乙磺酸溶液中，充分分散后，加入1～10毫升濃度為0.1～1mol/L的N-羥基丁二酰亞胺，持續(xù)反應1-3小時，即得到顆粒5；

S3、將顆粒5在0.1～10毫升PBS緩沖溶液中充分分散，得到混合液7，取1～20毫升混合液7與1～100微升待檢測物的相應抗體充分混合均勻，孵育1～5小時，得到顆粒5；

S4、將顆粒5經(jīng)過磁分離技術，PBS溶液清洗2次，即得到單分散強磁性免疫納米微球。

3.根據(jù)權利要求1或2所述的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述醇溶液為異丙醇、乙醇、正己醇溶液中的一種或多種的混合物。

4.根據(jù)權利要求3所述的一種單分散強磁性免疫納米微球的制備方法，其特征在于，所述待檢測物的相應抗體為任意一種可用所述單分散強磁性免疫納米微球檢測的致病菌的相對應的抗體。