[發明專利]一種HMGR基因mRNA在梨屬砧穗間傳遞的分子鑒定方法

有效

• 申請號: 201610390843.6
• 申請日: 2016-06-02
• 公開（公告）號: CN107460200B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 李天忠;郝理;王勝男;王圣元
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京衛平智業專利代理事務所(普通合伙) 11392
• 代理人: 張新利

本發明公開了HMGR基因mRNA在梨屬砧穗間傳遞的分子鑒定方法，包括如下步驟：(1)鴨梨為接穗，杜梨為砧木進行試管苗微嫁接；(2)分別提取杜梨、鴨梨以及嫁接后砧木與接穗的總RNA，反轉錄成cDNA，PCR擴增HMGR基因的全長，以此為模板進行第二次PCR，得到各自的HMGR基因片段；兩次PCR的上下游引物序列分別如SEQ ID NO.1?4所示；(3)限制性內切酶對第二次PCR產物進行酶切，比較嫁接前后的酶切譜圖鑒定傳遞情況。本發明提供的方法快速、靈敏，準確性高，簡便，能夠應用于其他梨屬植物。

技術領域

本發明涉及植物分子生物學領域，具體涉及的是HMGR基因mRNA分子在梨屬植物砧木和接穗間長距離傳遞的分子鑒定方法。

背景技術

在園藝作物生產實踐過程中，應用嫁接技術可以提高植株抗性、增加產量、改善果實品質，對品種的改良，經濟價值的提高都有著非常重要的意義，其中在果樹生產上嫁接更是得到了廣泛運用。在果樹生產上發現，不同砧木對接穗的生理生化特性、開花結實、環境的適應能力以及樹體生長發育等方面能產生不同的影響，而這些影響最終會對果品的形成以及后期的經濟價值起到關鍵性的作用。

到目前為止，已經發現砧穗間存在許多通過植物韌皮部遠距離傳遞的內源mRNA分子，長距離傳遞mRNA信號能夠由砧木傳遞到接穗，進而影響接穗生理和發育進程。因此，通過對果樹砧穗間長距離傳遞mRNA分子進行鑒定和機理研究，可以為mRNA在多年生木本植物遠距離傳遞機理以及砧穗間互作機理研究提供理論基礎，也可利用可傳遞mRNA開發一種可以定向改良接穗性狀的新型砧木育種方法，進而達到通過嫁接調控接穗性狀，避免轉基因果品，而獲得優良果實品質，提高經濟效益，為今后果樹育種及生產提供指導。

3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(HMGR)是甲羥戊酸途徑中合成萜類物質的第一個重要限速酶，是細胞質萜類化合物代謝中的重要調控位點(Bach,1986；Choi et al.,1992)，在植物的生長發育過程中起到非常重要的作用。在植物中HMGR多肽鏈部分都是由N-末端區、連接區、跨膜區和C-末端區這四部分組成，其中C-末端催化區域由基因中的近3’端編碼形成，且在多數植物中高度保守(Roberts,2007)。在目前所報道的植物中，HMGR多由一個基因家族編碼，且不同植物中同源基因的數目是不同的。擬南芥中已經克隆得到4個同源基因(Caelles et al.,1989；Lin et al.,1999；Theologis et al.,2000)，在蘋果中至少有2個不同基因能編碼HMGR，分別為MdHMG1和MdHMG2(Rupasinghe et al.,2001)，沙梨在NCBI中登錄編碼HMGR基因有2個，梨屬的杜梨PbHMGR1也被克隆得到(黃晶等，2015)。