[發明專利]一種HMGR基因mRNA在梨屬砧穗間傳遞的分子鑒定方法

有效

• 申請號: 201610390843.6
• 申請日: 2016-06-02
• 公開（公告）號: CN107460200B
• 公開（公告）日: 2020-07-28
• 發明（設計）人: 李天忠;郝理;王勝男;王圣元
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京衛平智業專利代理事務所(普通合伙) 11392
• 代理人: 張新利

1.一種HMGR mRNA分子在梨屬砧穗間傳遞的分子鑒定方法，包括如下步驟：

(1)鴨梨為接穗，杜梨為砧木進行試管苗微嫁接；

(2)分別提取杜梨、鴨梨以及嫁接后砧木與接穗的總RNA，反轉錄成cDNA，第一次PCR擴增HMGR基因的全長，以此為模板進行第二次PCR，得到各自的HMGR基因片段；

(3)限制性內切酶對第二次PCR產物進行酶切，比較嫁接前后的酶切譜圖鑒定傳遞情況；

步驟(2)中第一次PCR所采用的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.5-6所示；第二次PCR所采用的引物對的核苷酸序列如SEQ ID NO.7-8所示；

所述限制性內切酶為BamHⅠ；

經由15％聚丙烯酰胺凝膠進行分離酶切產物，鴨梨的產物得到18bp和193bp兩個片段，杜梨產物不能被酶切，只有一個211bp的片段；

在嫁接后的前7天，砧木和接穗各組織都表現為各自的特異性酶切條帶，從第8天開始，除了杜梨莖段木質部外，其余各組織都有新的酶切條帶出現，接穗鴨梨各部位除了含有自身特異性酶切條帶之外，同時還增加了砧木杜梨的特異性酶切條帶；而砧木杜梨的莖段韌皮部除了含有自身特異性酶切條帶之外，同時也增加了接穗鴨梨的特異性酶切條帶；

用于提取接穗總RNA的樣品選自微嫁接1-10天接穗鴨梨的葉片、莖尖、莖段韌皮部、嫁接口或砧木杜梨莖段韌皮部與木質部。

2.根據權利要求1所述的分子鑒定方法在果樹栽培上的應用。