[發明專利]一種糞腸球菌間接血凝檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 201610381927.3
• 申請日: 2016-06-01
• 公開（公告）號: CN105929179B
• 公開（公告）日: 2017-12-12
• 發明（設計）人: 劉永生;李學瑞;周建華;馬麗娜;劉永安;王立燕
• 申請（專利權）人: 中國農業科學院蘭州獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京中恒高博知識產權代理有限公司11249
• 代理人: 呂玉博

1.一種糞腸球菌間接血凝檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包括糞腸球菌間接血凝抗原，所述糞腸球菌間接血凝抗原由糞腸球菌CCTCC M 2016027的全菌蛋白和醛化-鞣酸化綿羊紅細胞組成；所述糞腸球菌全菌蛋白的濃度為20μg/ml-40μg/ml；所述糞腸球菌CCTCC M 2016027的全菌蛋白和醛化-鞣酸化綿羊紅細胞的體積比為1:1。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括標準陽性血清。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括標準陰性血清。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒還包括稀釋液。

5.根據權利要求1-4任一所述的試劑盒，其特征在于：所述糞腸球菌間接血凝抗原的制備方法為：

（1）糞腸球菌菌體抗原的制備

對糞腸球菌進行擴大培養，離心收獲菌體后，洗滌，重懸，再于冰浴中以超聲波間歇破碎10min，離心取上清，得到糞腸球菌菌體抗原懸浮液；

（2）紅細胞的固定和醛化-鞣酸化

將保存于Alsever's 液中的公綿羊血在4℃靜置3-7天后，按常規方法對綿羊紅細胞進行洗滌、戊二醛固定和鞣酸處理，所用的溶液均為 pH 7.2濃度為0.15M的PBS，制備好的綿羊紅細胞用 pH7.2濃度為0.15M的PBS懸浮至5%濃度，得到醛化-鞣酸化后的紅細胞懸 液；

（3）糞腸球菌間接血凝抗原的制備

以步驟（1）得到的糞腸球菌菌體抗原致敏步驟（2）得到的紅細胞，得到糞腸球菌間接血凝抗原，糞腸球菌間接血凝抗原的終濃度為20μg/ml-40μg/ml。

6.權利要求1-4任一所述的試劑盒在檢測糞腸球菌中的應用，所述應用是非疾病的診斷和治療目的的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于：同時檢測n個待測血清的具體方法為：

（1）在滴定板1-n列每列第1孔分別加入待檢血清，第n+1、n+2、n+3列第1孔分別加入同樣體積的標準陽性血清、標準陰性血清和空白對照，將1-n+2列從第1孔開始進行4倍倍比稀釋至最后一孔；其中，n≤9；

（2）每孔加入糞腸球菌間接血凝抗原；

（3）震蕩滴定板，充分混勻，置37℃恒溫箱1.5-2h；

（4）根據紅細胞凝集程度判定待檢血清效價，以出現50%紅細胞凝集的最大稀釋倍數作為該份血清的抗體效價。