[發明專利]一種褐色喜熱裂孢菌發酵生產幾丁質酶的方法

在審

• 申請號: 201610374195.5
• 申請日: 2016-05-30
• 公開（公告）號: CN105779421A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 鄧禹;張曉娟;趙梅;劉曉迪
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12R1/01
• 代理公司: 南京禹為知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 32272
• 代理人: 王曉東

技術領域

本發明涉及生物工程領域，特別涉及一種褐色喜熱裂孢菌發酵生產幾丁質 酶的方法。

背景技術

幾丁質酶(Chitinase，EC3.2.1.14)是一種廣泛存在于動物、植物和微生物 中的酶，幾丁質酶能催化分解幾丁質，產生幾丁寡糖和幾丁二糖。幾丁質酶的 水解產物低聚糖有抗菌作用,可以調節生物體的免疫力，還可以抑制腫瘤細胞的 生長等。幾丁質酶對植物真菌病害的防治也有作用。因此，幾丁質酶在食品、 醫藥、農業以及化妝品等行業具有獨特的使用價值。

由于微生物幾丁質酶比動植物幾丁質酶催化作用的pH值和溫度范圍更 寬，且制備相對更容易，所以目前國內外獲得幾丁質酶的方法主要是微生物發 酵法。很多微生物都有產生幾丁質酶的能力，但是具有高產耐高溫幾丁質酶能 力的不多。從土壤中分離菌株是菌種選育的重要途徑。從自然界土樣中篩選出 有較高產酶耐高溫能力的菌株，并提高其產酶能力，這在發酵工業菌種選育上 具有卓越的成就，迄今國內外發酵工業中所使用的生產菌株大部分是從土壤中 選育出來的。

利用微生物生產幾丁質酶過程中發酵條件對于微生物產幾丁質酶十分重 要，微生物產幾丁質酶發酵除受溫度、pH、溶氧、培養時間影響外，其產量 深受培養基組分影響。

發明內容

本部分的目的在于概述本發明的實施例的一些方面以及簡要介紹一些較 佳實施例。在本部分以及本申請的說明書摘要和發明名稱中可能會做些簡化或 省略以避免使本部分、說明書摘要和發明名稱的目的模糊，而這種簡化或省略 不能用于限制本發明的范圍。

鑒于上述和/或現有酶基因工程和酶工程領域中存在的問題，提出了本發 明。

因此，本發明的目的是提供一種褐色喜熱裂孢菌發酵生產幾丁質酶的方 法，以填補微生物生產幾丁質酶的技術空白，生產出的幾丁質酶具有耐高溫特 性以及具有較大的pH耐受范圍。

為解決上述技術問題，本發明提供了如下技術方案：一種褐色喜熱裂孢菌 發酵生產幾丁質酶的方法，其特征在于，包括，將所述褐色喜熱裂孢菌在加富 培養基中50～55℃、200～240r/min條件下培養20～24h，制得一級種子液；以 2～3％的接種量將一級種子液轉接在加富培養基中，在50～55℃、200～240r/min 條件下培養20～24h制得二級種子液；以2～3％的接種量將二級種子液接入發酵 培養基中，在50～55℃、200～240r/min條件下培養50～54h，得到幾丁質酶產 品。

作為本發明所述褐色喜熱裂孢菌發酵生產幾丁質酶的方法的一種優選方 案，其中：所述加富培養基以質量百分比計，包括，NaCl1.00～1.40％、(NH₄) ₂SO₄2.40～2.60％、KH₂PO₄0.65～0.80％、Na₂HPO₄7.00～7.50％、EDTA0.01～0.03％、 MgSO₄·7H₂O0.05～0.10％、FeSO₄·7H₂O0.005～0.010％、MnSO₄· 7H₂O0.005～0.007％、CaCl₂·2H₂O0.003～0.007％、生物素0.00007～0.00010％、硫 銨素0.00007～0.00010％、酵母粉0.010～0.020％。

作為本發明所述褐色喜熱裂孢菌發酵生產幾丁質酶的方法的一種優選方 案，其中：所述加富培養基，其碳源包括纖維二糖、葡萄糖或木聚糖中的一種 或幾種。

作為本發明所述褐色喜熱裂孢菌發酵生產幾丁質酶的方法的一種優選方 案，其中：所述加富培養基，其pH為6.0～8.0。