[發明專利]一種辛可耐因Ib的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201610363764.6
• 申請日: 2016-05-26
• 公開（公告）號: CN106046014B
• 公開（公告）日: 2018-05-01
• 發明（設計）人: 劉岱琳;宋光明;趙艷敏;郭敏娜
• 申請（專利權）人: 天津市科曼思特醫藥科技發展有限公司
• 主分類號: C07D493/04
• 分類號: C07D493/04;A61K31/37;A61P3/10;A61P9/00
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司11280
• 代理人: 李渤

技術領域

本發明涉及一種辛可耐因Ib的制備方法，以及辛可耐因Ib在制備用于防治糖尿病及其血管并發癥的藥物中的應用。

背景技術

糖尿病是一種由于胰島素分泌缺陷或胰島素作用障礙所致的以高血糖為特征的代謝性疾病。最近的流行病調查證實，我國的糖尿病患病率高達11.6％，在糖尿病人口絕對數方面已成為全球之冠。此外，據世界衛生組織統計，糖尿病并發癥高達100多種，是目前已知并發癥最多的一種疾病。而糖尿病的危害主要來自糖尿病血管并發癥，長期血糖增高會誘發大血管、微血管受損并危及心、腦、腎、周圍神經、眼睛、足等。因此對糖尿病血管并發癥的防治研究極為迫切。糖尿病個體體內蛋白質發生非酶糖基化致使非酶糖基化代謝產物增多，是導致糖尿病血管并發癥的重要原因之一。非酶糖基化代謝產物增多，可引發心肌細胞代謝紊亂、心肌細胞鈣轉運缺陷，導致心肌細胞功能異常；同時，非酶糖基化代謝產物能使腎小球合成Ⅳ型膠原，內皮、系膜和平滑肌細胞增殖。因此，糖尿病高糖狀態下非酶糖基化代謝產物過多是糖尿病心肌疾病和糖尿病腎病等糖尿病并發癥的發生和發展的共同誘因之一。

自由基清除劑可以顯著抑制非酶糖基化代謝產物的形成，糖尿病時增強的氧化應激可以加速非酶糖基化代謝產物的形成，進而促進糖尿病血管并發癥的發展。因此，抑制非酶糖基化反應，降低非酶糖基化代謝產物生成是防治糖尿病血管并發癥的重要策略。

辛可耐因Ib是一種具有抗氧化作用的化合物，最早在薔薇科植物枇杷中分離獲得，后來陸續在薔薇科枇杷屬的山茶和紅樹科的秋茄以及菝契科粗莖菝契等植物中被發現。辛可耐因Ib是一種黃烷3-醇類的鞣質類成分，結構式如式Ⅰ所示。該化合物是通過C3-C6連接構成，顯著區別于通過C4-C8或者C4-C6的連接方式構成的原花青素類成分。該化合物具有很強的抗氧化作用，可有效清除DPPH自由基。目前尚沒有關于辛可耐因Ib如何在植物中高效提取的記載，也沒有將其應用在藥物中的報道。

發明內容

本發明的發明人意外地發現了辛可耐因Ib存在于蘋果的果實中，并且在進一步的研究中發現辛可耐因Ib能夠降低大鼠的血糖濃度，同時能夠抑制糖尿病大鼠體內非酶糖基化反應。因而，本發明的目的在于提供一種辛可耐因Ib的制備方法，同時還提供了辛可耐因在制備用于防治糖尿病及糖尿病血管并發癥的藥物中的應用。

一種辛可耐因Ib的制備方法，所述方法包括：

1)提供粗提物，常溫下將所述粗提物溶于水中得到粗提物水溶液；其中，所述粗提物為植物的根、果實、莖和/或葉的醇提物，所述植物選自薔薇科植物、紅樹科植物、葡萄科葡萄屬植物和菝契科植物中的一種或多種；優選地，將所述粗提物以質量比1：10的比例溶于水中；

2)將所述粗提物水溶液經HP20型大孔樹脂吸附，然后以乙醇水溶液梯度洗脫，收集富含辛可耐因Ib的洗脫液，合并所述洗脫液，減壓濃縮，得辛可耐因Ib的初級富集物；

3)將步驟2)得到的初級富集物溶于等質量的甲醇，得到初級富集物的甲醇溶液，將所述初級富集物的甲醇溶液與60～100目的硅膠粉混合，減壓拌樣至干，干法上樣，以二氯甲烷-甲醇為洗脫液過硅膠色譜柱梯度洗脫分離，收集并合并富含辛可耐因Ib的洗脫液，減壓濃縮至干，得辛可耐因Ib的次級富集物；其中，所述硅膠粉的質量為所述初級富集物質量的1.5～2.5倍；所述硅膠色譜柱中硅膠質量為所述初級富集物質量的10～20倍；

4)將所述次級富集物溶解于2倍質量的水中得到次級富集物的水溶液，將所述次級富集物的水溶液以甲醇水溶液為梯度洗脫液通過大孔聚合物填料色譜柱分離，收集并合并富含辛可耐因Ib的洗脫液，減壓濃縮至干，得辛可耐因Ib的三級富集物；優選地，所述大孔聚合物填料色譜柱為Toyopearl HW-40柱；

5)將4)得到的三級富集物以50％甲醇水溶液為洗脫液通過C18柱精制，在254nm檢測收集辛可耐因Ib的色譜峰，收集洗脫液，減壓濃縮，冷凍干燥得到辛可耐因Ib；優選地，所述C18柱為Cosmosil ODS柱。

在根據本發明的一個實施方案中，所述薔薇科植物為薔薇科蘋果屬植物。

在根據本發明的一個實施方案中，所述粗提物為蘋果多酚。

在根據本發明的一個實施方案中，步驟2)中梯度洗脫的順序為水、體積百分比濃度分別為10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液；優選地，每半個柱床體積作為一個接收體積檢測洗脫樣品。