[發明專利]檢測水稻黑條矮縮病毒和南方水稻黑條矮縮病毒的RT?PCR及其應用

有效

• 申請號: 201610363054.3
• 申請日: 2016-05-26
• 公開（公告）號: CN107130057B
• 公開（公告）日: 2018-02-09
• 發明（設計）人: 周羽;王振華;李新海;翁建峰;邸宏;張泓;祖洪月;張曉明
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/94
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

1.一種遺傳標記物在鑒別水稻黑條矮縮病毒和南方水稻黑條矮縮病毒中的應用，所述遺傳標記物來源于水稻黑條矮縮病毒基因組，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。

2.用于檢測水稻黑條矮縮病毒和南方水稻黑條矮縮病毒的特異性引物組合，其特征在于，用于檢測水稻黑條矮縮病毒的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示，用于檢測南方水稻黑條矮縮病毒的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示。

3.權利要求2所述的特異性引物組合在檢測南方水稻黑條矮縮病毒和水稻黑條矮縮病毒中的應用。

4.含有權利要求2所述特異性引物組合的檢測試劑盒。

5.一種檢測水稻黑條矮縮病毒和南方水稻黑條矮縮病毒的方法，其特征在于，對待測樣本提取基因組RNA后反轉錄cDNA以其為模板，利用SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的特異性引物對分別進行RT-PCR，檢測待測樣本中的水稻黑條矮縮病毒或南方水稻黑條矮縮病毒。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，

當待測樣本中含有水稻黑條矮縮病毒時，采用SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2引物對的RT-PCR擴增產物片段大小為420 bp左右，而SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4引物對的PCR無擴增；

當待測樣本中含有南方水稻黑條矮縮病毒時，采用SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4引物對的RT-PCR擴增產物片段大小為403bp左右，而SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2引物對的PCR無擴增。

7.如權利要求5所述的方法，其特征在于，所述RT-PCR的反應條件為預變性95℃ 5min；95℃ 30sec，55℃ 30sec，68℃ 60sec,共35個循環；68℃ 10min，12℃保存。

8.如權利要求5-7任一所述的方法，其特征在于，所述待測樣本為玉米、水稻或小麥。