[發(fā)明專利]L-羥脯氨酸的生物轉(zhuǎn)化方法

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• 申請日: 2016-05-27
• 公開（公告）號: CN107435056A
• 公開（公告）日: 2017-12-05
• 發(fā)明（設計）人: 易菊陽;劉立明;陳建華;潘崇德
• 申請（專利權(quán)）人: 紹興百茵生物技術有限公司
• 主分類號: C12P13/24
• 分類號: C12P13/24;C12R1/19
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種L-羥脯氨酸的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，包括以下步驟：以L-脯氨酸、α-酮戊二酸為底物，以含脯氨酸-4-羥化酶的工程菌全細胞為催化劑，再加入表面活性劑和添加劑建立生物轉(zhuǎn)化體系進行轉(zhuǎn)化反應，得到含有L-羥脯氨酸的轉(zhuǎn)化液。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的L-羥脯氨酸的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述表面活性劑為烷基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯酰胺、失水山梨醇酯、吐溫80、曲拉通X-100中的一種或幾種的混合物，所述添加劑為硫酸亞鐵、氯化亞鐵、硝酸亞鐵中的一種或幾種的混合物。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的L-羥脯氨酸的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述表面活性劑為失水山梨醇酯、吐溫80、曲拉通X-100按質(zhì)量比為3-4︰10-40︰1組成，所述添加劑為硫酸亞鐵、氯化亞鐵、硝酸亞鐵按質(zhì)量比為3-4︰2-5︰1組成的混合物。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的L-羥脯氨酸的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述表面活性劑為烷基酚聚氧乙烯醚、聚氧乙烯酰胺按質(zhì)量比為1-9︰1組成。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的L-羥脯氨酸的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述表面活性劑為失水山梨醇酯、吐溫80、曲拉通X-100按質(zhì)量比為3︰36︰1組成，所述添加劑為硫酸亞鐵、氯化亞鐵、硝酸亞鐵按質(zhì)量比為3.5︰2.5︰1組成的混合物。

6.根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項權(quán)利要求所述的L-羥脯氨酸的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述含脯氨酸-4-羥化酶的工程菌全細胞的濃度控制為10-30g/L；所述表面活性劑與含脯氨酸-4-羥化酶的工程菌全細胞的質(zhì)量比控制為2-6％；所述添加劑與含脯氨酸-4-羥化酶的工程菌全細胞的質(zhì)量比為1-5％。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的L-羥脯氨酸的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，所述含脯氨酸-4-羥化酶的工程菌全細胞的濃度控制為14g/L；所述表面活性劑與含脯氨酸-4-羥化酶的工程菌全細胞的質(zhì)量比控制 為3.5％；所述添加劑與含脯氨酸-4-羥化酶的工程菌全細胞的質(zhì)量比為2.3％。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的L-羥脯氨酸的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，L-脯氨酸與α-酮戊二酸質(zhì)量比控制為1.5-5︰1，生物轉(zhuǎn)化體系的溫度控制為24-50℃；生物轉(zhuǎn)化體系的的pH值控制為4-8；所述轉(zhuǎn)化在搖瓶、燒杯或發(fā)酵罐中進行，當在搖瓶中進行時，搖床的轉(zhuǎn)速控制為150-250r/min，當在燒杯或發(fā)酵罐中進行時，機械攪拌轉(zhuǎn)速控制為200-500r/min。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的L-羥脯氨酸的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，L-脯氨酸與α-酮戊二酸質(zhì)量比控制為2-3︰1，生物轉(zhuǎn)化體系的溫度控制為30-40℃；生物轉(zhuǎn)化體系的的pH值控制為6-8；所述轉(zhuǎn)化在搖瓶、燒杯或發(fā)酵罐中進行，當在搖瓶中進行時，搖床的轉(zhuǎn)速控制為200r/min，當在燒杯或發(fā)酵罐中進行時，機械攪拌轉(zhuǎn)速控制為300r/min。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的L-羥脯氨酸的生物轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，對含有L-羥脯氨酸的轉(zhuǎn)化液進行純化，包括如下步驟：

1)將含有L-羥脯氨酸的轉(zhuǎn)化液用鹽酸酸化后，加入亞硝酸鈉，再用活性炭脫色至無色；

2)將步驟1)中脫色后的含有L-羥脯氨酸的轉(zhuǎn)化液，過離子交換柱，洗脫；

3)將步驟2)洗脫后所得的洗脫液濃縮，用無水乙醇析晶，過濾；

4)將步驟3)過濾后所得的晶體加入無水乙醇，攪拌均勻后靜置8-16h，抽濾，烘干，即得精制L-羥脯氨酸晶體。