[發(fā)明專利]一種食用百合的花藥培養(yǎng)脫毒方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610357914.2
• 申請日: 2016-05-26
• 公開（公告）號: CN105794653B
• 公開（公告）日: 2017-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 華小平;錢振權(quán)
• 申請（專利權(quán)）人: 西諾（北京）花卉種業(yè)有限公司
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 東莞市神州眾達(dá)專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)44251
• 代理人: 陳世洪

1.一種食用百合的花藥培養(yǎng)脫毒方法，其特征在于：該花藥培養(yǎng)脫毒方法的詳細(xì)步驟如下：

（1）配制食用百合花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基

食用百合花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)基按每升蒸餾水中由以下物質(zhì)配制而成：

大量元素：KNO₃ 2500～2700mg/L，NH₄NO₃ 1600～1800mg/L，KH₂PO₄ 440～480mg/L，MgSO₄?7H₂O 350～390mg/L，CaCl₂?2H₂O 820～860mg/L；

微量元素：MnSO₄?4H₂O 20～25mg/L，ZnSO₄?7H₂O 8.0～9.0mg/L，H₃BO₃ 6.0～6.5mg/L，KI 0.8～0.85mg/L，CuSO₄?5H₂O 0.02～0.03mg/L，CoCl₂?6H₂O 0.02～0.03mg/L，Na₂MoO₄?2H₂O 0.2～0.3mg/L；

鐵鹽：Na₂-EDTA?2H₂O 35～40mg/L，F(xiàn)eSO₄?7H₂O 25～30mg/L；

有機(jī)成分：肌醇90～110mg/L，維生素B1 0.09～0.11mg/L，維生素B6 0.45～0.55mg/L，煙酸0.45～0.55mg/L，甘氨酸1.8～2.2mg/L，絲氨酸0.75～0.85mg/L；

激素：2，4-D 3.2～3.6mg/L，KT 2.0～2.4mg/L；

凝固劑：植物凝膠6.0～6.5g/L；

活性添加劑：椰乳14～16g/L，甘露醇20～24g/L，水解蛋白0.8～1.0g/L，活性炭0.35～0.45g/L；

碳源：蔗糖55～65g/L；

將大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分和激素分別配制成一定濃度倍數(shù)的母液貯備，配制時，預(yù)先量出配制培養(yǎng)基總量一半體積的蒸餾水，分別加入一定體積或質(zhì)量的大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、活性添加劑，定容，加熱至60-80℃，然后加入碳源、凝固劑和激素，攪拌至沸騰后，培養(yǎng)基完全溶解，停止加熱，調(diào)節(jié)pH為5.8-6.0，然后將培養(yǎng)基分裝于500ml的三角瓶中，每瓶盛120ml～150ml的培養(yǎng)基，密封后置于溫度為121℃、壓力為15kPa高壓蒸汽條件下滅菌20min，自然冷卻凝固；

（2）接種花藥的選材

在食用百合正常現(xiàn)蕾開花季節(jié)，上午取材，用冰壺帶回實(shí)驗(yàn)室；

（3）花藥消毒與接種

將花蕾用自來水沖洗10～20min，在超凈工作臺無菌條件下，先用75%酒精消毒2min，再用0.1%升汞+2-3滴吐溫-80消毒15min，無菌水沖洗3～4次后，從花蕾中取出帶有花絲的花藥，接種到步驟（1）的誘導(dǎo)培養(yǎng)基上；

（4）花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)

將接種花藥后的培養(yǎng)基進(jìn)行花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)，50-65d后誘導(dǎo)出花藥胚性愈傷；

（5）胚性愈傷分化與繼代培養(yǎng)

無菌條件下將誘導(dǎo)成功的胚性愈傷組織轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上，光照條件下分化培養(yǎng)25-40天至小芽長至0.6cm以上，將高于0.6cm的小芽切下，轉(zhuǎn)接入繼代培養(yǎng)基上繼代培養(yǎng)，2-3個月后得到直徑0.8-2.0cm 的百合小鱗莖；

（6）食用百合鱗莖的煉苗與移栽

將食用百合小鱗莖的三角瓶封口膜打開煉苗，7～10d后將小鱗莖從三角瓶中取出，清洗掉根部的培養(yǎng)基殘留物，移栽入溫室內(nèi)，定期噴施百合壯苗營養(yǎng)液來壯苗；

（7）食用百合單倍體植株的剔除

采用根尖壓片法觀察所得食用百合植株的倍性，剔除僅含12條染色體的百合單倍體植株；

步驟（2）中的篩選百合花蕾的標(biāo)準(zhǔn)為：按照花蕾長度為22～28mm、花蕾內(nèi)花藥中的小孢子大都處于單核期的標(biāo)準(zhǔn)選擇花蕾；

所述步驟（4）中花藥誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)條件控制為：溫度控制為24℃-27℃，濕度控制為65%-80%，黑暗條件；

所述步驟（5）中分化培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為：MS+6.5%蔗糖+0.8mg/L2，4-D+0.25mg/L NAA；培養(yǎng)條件控制為：溫度25℃-28℃，濕度65%-80%，光照為1200-1800Lx，光周期為14h光/10h暗；

所述步驟（5）中繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基配方為：1/2MS+6.0%蔗糖+0.6mg/L6-BA +0.15mg/L NAA；培養(yǎng)條件控制為：溫度25℃-28℃，濕度65%-80%，光照為1200-1800Lx，光周期為14h光/10h暗；

所述步驟（6）中百合壯苗營養(yǎng)液的配方為：KH₂PO₄ 0.3g/L，CaSO₄ 0.1g/L，MgSO₄?7H₂O 0.1g/L，ZnSO₄?7H₂O 0.2mg/L，F(xiàn)eSO₄?7H₂O 0.6mg/L，CuSO₄ 0.1mg/L，MnSO₄?4H₂O 0.5mg/L，H₃BO₃ 0.2mg/L；將以上各成分定量充分溶解在純凈水里即成營養(yǎng)液；

所述的百合壯苗營養(yǎng)液的用法為：百合鱗莖移栽時澆一次，以后每7-10天澆一次，每次用量為50-80ml/株百合。