[發(fā)明專利]一種以菌糠提取液為原料制備金針菇液體菌種的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610346241.0
• 申請日: 2016-05-23
• 公開（公告）號: CN105779313A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 安雪
• 申請（專利權(quán)）人: 沈陽德寶嘉泓農(nóng)業(yè)科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京志霖恒遠知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11435
• 代理人: 孟阿妮

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種液體菌種的制備方法，尤其涉及一種以菌糠提取液為原料制備金 針菇液體菌種的方法。

背景技術(shù)

金針菇(Flammulinavelutipes)，學(xué)名毛柄金錢菌，又稱毛柄小火菇、樸菇、冬菇、 凍菌、金菇、智力菇等。金針菇營養(yǎng)豐富，它的氨基酸含量高于一般菇類，尤其是賴氨酸的含 量非常高，具有促進兒童智力發(fā)育的功能。研究表明，金針菇還具有很好的抗癌作用。因此， 金針菇不僅是一種美味食品，又是很好的保健品，近年來更是倍受人們青睞，其產(chǎn)量逐年上 升。通過液體菌種培養(yǎng)金針菇的方法具有生產(chǎn)周期短、菌齡一致、萌發(fā)快、出菇齊、活力強、 污染率低的優(yōu)點，因此金針菇的現(xiàn)代化工業(yè)生產(chǎn)多以液體菌種栽培模式為主，從而將傳統(tǒng) 的固體菌種栽培模式逐漸取代。但目前國內(nèi)金針菇液體菌種的制備方法較為單一，培養(yǎng)基 配方成分均從市場購買，不僅價格昂貴并且組分單一，這在一定程度上限制了金針菇液體 菌株的活力提升空間；此外，培養(yǎng)基配方的單一性限制了對金針菇生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的廢棄 物的重新利用，造成了極大的資源浪費與環(huán)境壓力。

發(fā)明內(nèi)容

為了解決上述技術(shù)所存在的不足之處，本發(fā)明提供了一種以菌糠提取液為原料制 備金針菇液體菌種的方法。

為了解決以上技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：一種以菌糠提取液為原料制 備金針菇液體菌種的方法，包括以下步驟：

A、制備菌糠提取液：富集金針菇采收后剩余的菌糠，按照料水比1：25進行配制，室 溫下靜止24h，然后用八層紗布或過濾裝置過濾，濾液即為菌糠提取液；

B、配制搖瓶培養(yǎng)基：搖瓶培養(yǎng)基的配方為：

一級白砂糖36g、140目豆粕粉5.8g、

KH₂PO₄分析純1.24g、MgSO₄·7H₂O分析純1.28g、

菌糠提取液2000mL；

調(diào)pH至6.0～6.9后，將上述培養(yǎng)基分裝至含轉(zhuǎn)子的三角燒瓶中；用棉塞塞緊三角 燒瓶瓶口，并用鋁箔紙包緊瓶口，121℃下高壓滅菌30～60min；滅菌結(jié)束后，冷卻至室溫；

C、接種：在無菌環(huán)境下，用接種環(huán)鉤取金針菇母種菌塊8～10塊，轉(zhuǎn)接到冷卻后的 搖瓶培養(yǎng)基中，20～25℃條件下?lián)u瓶培養(yǎng)7天，搖床轉(zhuǎn)速150r/min；

D、菌球形態(tài)及菌絲含量測定：搖瓶培養(yǎng)結(jié)束后，首先觀察培養(yǎng)瓶內(nèi)菌球形態(tài)及液 體澄清度，然后用pH計測試菌液的pH，判斷菌種的生長狀況；再隨機抽取三個搖瓶菌種，放 在磁力攪拌器上將菌種攪碎，用注射器吸取10g菌液于已知質(zhì)量的離心管中，配平后離心棄 上清液，通過稱量沉淀和離心管的質(zhì)量，計算出菌絲的平均含量，并與常規(guī)方法制備的菌種 菌絲含量相對比；

E、酶活力測試：隨機抽取九個搖瓶菌種，平均分成三組；首先制備粗酶液并繪制葡 萄糖標準曲線；將三組搖瓶菌種在磁力攪拌器上攪拌破碎分別取5mL破碎后的菌液于10mL 離心管內(nèi),3500r/min離心10min,取上清液做為粗酶液；得到的三組粗酶液分別進行羧甲基 纖維素酶酶活、半纖維素酶酶活、漆酶酶活的測試，并與常規(guī)方法制備的粗酶液酶活進行對 比；

F、發(fā)酵罐擴培：按照以下配方進行發(fā)酵培養(yǎng)基的配制：

一級白砂糖12595g、140目豆粕粉2025g、

KH₂PO₄分析純429g、MgSO₄·7H₂O分析純443g、

菌糠提取液700L；

調(diào)pH至6.0～6.9后高壓滅菌；將發(fā)酵罐內(nèi)的發(fā)酵培養(yǎng)基冷卻至室溫，接種步驟C中 搖瓶培養(yǎng)結(jié)束后的菌液；20～25℃條件下發(fā)酵培養(yǎng)7天，通氣量0.1MP；

G、制作栽培瓶：稱取玉米芯、米糠、麩皮、棉籽殼、大豆皮、啤酒糟、甜菜渣，將上述 原材料攪拌混合25min，然后邊加菌糠提取液邊繼續(xù)攪拌40～50min，調(diào)制成含水量為65％ ±1、pH為6.3～6.9的混合材料；在栽培瓶中種入上述混合材料，使每瓶標重為1020±20g； 采用五孔打眼法，使料面平整距離栽培瓶瓶口2.0cm，121℃高壓滅菌80～100min，冷卻至室 溫，最后接種步驟F擴培后的發(fā)酵液菌種。

葡萄糖標準曲線的繪制方法如下：