[發明專利]一種以菌糠提取液為原料制備金針菇液體菌種的方法

有效

• 申請號: 201610346241.0
• 申請日: 2016-05-23
• 公開（公告）號: CN105779313A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 安雪
• 申請（專利權）人: 沈陽德寶嘉泓農業科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 北京志霖恒遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11435
• 代理人: 孟阿妮

1.一種以菌糠提取液為原料制備金針菇液體菌種的方法，其特征在于：所述方法包括 以下步驟：

A、制備菌糠提取液：富集金針菇采收之后剩余的菌糠，按照料水比1：25進行配制，配制 完成后室溫下靜止24h，然后用八層紗布或過濾裝置過濾，過濾后的濾液即為菌糠提取液；

B、配制搖瓶培養基：搖瓶培養基的配方為：

一級白砂糖36g、140目豆粕粉5.8g、

KH₂PO₄分析純1.24g、MgSO₄·7H₂O分析純1.28g、

菌糠提取液2000mL；

調pH至6.0～6.9后，將上述培養基分裝至含轉子的三角燒瓶中；用棉塞塞緊三角燒瓶 瓶口，并用鋁箔紙包緊瓶口，121℃下高壓滅菌30～60min；滅菌結束后，冷卻至室溫；

C、接種：在無菌環境下，用接種環鉤取金針菇母種菌塊8～10塊，轉接到冷卻后的搖瓶 培養基中，20～25℃條件下搖瓶培養7天，搖床轉速150r/min；

D、菌球形態及菌絲含量測定：搖瓶培養結束后，首先觀察培養瓶內菌球形態及液體澄 清度，然后用pH計測試菌液的pH，判斷菌種的生長狀況；再隨機抽取三個搖瓶菌種，放在磁 力攪拌器上將菌種攪碎，用注射器吸取10g菌液于已知質量的離心管中，配平后離心棄上清 液，通過稱量沉淀和離心管的質量，計算出菌絲的平均含量，并與常規方法制備的菌種菌絲 含量相對比；

E、酶活力測試：隨機抽取九個搖瓶菌種，平均分成三組；首先制備粗酶液并繪制葡萄糖 標準曲線；將三組搖瓶菌種在磁力攪拌器上攪拌破碎，分別取5mL破碎后的菌液于10mL離心 管內,3500r/min離心10min,取上清液做為粗酶液；得到的三組粗酶液分別進行羧甲基纖維 素酶酶活、半纖維素酶酶活、漆酶酶活的測試，并與常規方法制備的粗酶液酶活進行對比；

F、發酵罐擴培：按照以下配方進行發酵培養基的配制：

一級白砂糖12595g、140目豆粕粉2025g、

KH₂PO₄分析純429g、MgSO₄·7H₂O分析純443g、

菌糠提取液700L；

調pH至6.0～6.9后高壓滅菌；將發酵罐內的發酵培養基冷卻至室溫，接種步驟C中搖瓶 培養結束后的菌液；20～25℃條件下發酵培養7天，通氣量0.1MP；

G、制作栽培瓶：稱取玉米芯、米糠、麩皮、棉籽殼、大豆皮、啤酒糟、甜菜渣，將上述原材 料攪拌混合25min，然后邊加菌糠提取液邊繼續攪拌40～50min，調制成含水量為65％±1、 pH為6.3～6.9的混合材料；在栽培瓶中種入上述混合材料，使每瓶標重為1020±20g；采用 五孔打眼法，使料面平整距離栽培瓶瓶口2.0cm，121℃高壓滅菌80～100min，冷卻至室溫， 最后接種步驟F擴培后的發酵液菌種。

2.根據權利要求1所述的以菌糠提取液為原料制備金針菇液體菌種的方法，其特征在 于：所述葡萄糖標準曲線的繪制方法如下：

Ⅰ、精確稱取無水葡萄糖250.0mg，溶于蒸餾水中并定容至250mL，得到1.0mg/mL的葡萄 糖標準溶液；將葡萄糖標準溶液分別稀釋至0mg/mL、0.2mg/mL、0.4mg/mL、0.6mg/mL、0.8mg/ mL、1.0mg/mL；

Ⅱ、通過DNS法測定上述不同濃度的葡萄糖溶液在540nm波長處的吸光度值，繪制葡萄 糖標準曲線，得出回歸方程。

3.根據權利要求1所述的以菌糠提取液為原料制備金針菇液體菌種的方法，其特征在 于：所述羧甲基纖維素酶酶活的測試方法為：在20ml具塞試管中加入0.5％的羧甲基纖維素 鈉1.5mL，再加入稀釋10倍的粗酶液0.5mL，于50℃恒溫水浴鍋中水浴30min，取出后立即加 入DNS試劑3mL，然后放入100℃熱水浴中5min，取出冷卻至室溫后用蒸餾水定容至20mL，混 勻；用分光光度計在540nm處測定OD值，以煮沸15min滅活酶液為對照，計算酶活力。