[發(fā)明專利]動(dòng)物膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的制備方法、所得的基質(zhì)及應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610342041.8
• 申請(qǐng)日: 2016-05-20
• 公開（公告）號(hào): CN107397978B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張國(guó)強(qiáng);柳軼男;楊新廣;董驤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京納通科技集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): A61L27/36
• 分類號(hào): A61L27/36
• 代理公司: 北京律智知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11438
• 代理人: 王瑩;于寶慶

本發(fā)明提供了一種動(dòng)物膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的制備方法，取動(dòng)物膀胱的粘膜下層，經(jīng)過病毒滅活步驟、脫脂步驟以及脫細(xì)胞步驟制得，其中，所述脫細(xì)胞步驟包括多次凍融步驟以及所述多次凍融步驟之后的脫細(xì)胞溶液脫細(xì)胞步驟，所述凍融步驟中，冷凍溫度為?70℃～?90℃，冷凍時(shí)間為5～15小時(shí)。本發(fā)明還提供了通過所述制備方法制得的脫細(xì)胞基質(zhì)及其應(yīng)用。本發(fā)明提供的制備方法通過反復(fù)凍融與脫細(xì)胞溶液脫細(xì)胞處理相結(jié)合制得膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)，最大限度保留了細(xì)胞外基質(zhì)的彈性纖維與膠原網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，同時(shí)抗原去除徹底，可應(yīng)用于膀胱、尿道和輸尿管修復(fù)領(lǐng)域。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，具體涉及一種動(dòng)物膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的制備方法、所得的脫細(xì)胞基質(zhì)及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

對(duì)于膀胱、尿道和輸尿管的缺損，目前臨床上大多采用三種組織替代材料：合成高分子材料、同種異體脫細(xì)胞基質(zhì)、異種脫細(xì)胞基質(zhì)。采用不可降解的合成高分子材料如聚硅酮、聚四氟乙烯等，容易發(fā)生組織壞死、瘺、狹窄、外滲、結(jié)石形成等情況，而采用聚乳酸、聚羥基乙酸等可降解的合成高分子材料用于膀胱、尿道和輸尿管缺損，雖然取材容易，制備方便，但是降解的過程中炎癥反應(yīng)較強(qiáng)，影響細(xì)胞的分化增殖。同種異體脫細(xì)胞基質(zhì)原材料來源有限，因此，異種脫細(xì)胞基質(zhì)深受廣大研究者的青睞。

豬膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)經(jīng)特殊脫細(xì)胞處理后，已去除了含細(xì)胞抗原的細(xì)胞成分，僅保留了細(xì)胞外基質(zhì)，包含彈性纖維與膠原網(wǎng)狀支架，免疫原性大大降低，不易引起宿主產(chǎn)生免疫排斥反應(yīng)。其優(yōu)點(diǎn)主要有：質(zhì)地柔軟、易塑形、不會(huì)破碎和遇水皺縮、應(yīng)用方便，可為機(jī)體提供良好的供宿主細(xì)胞“爬行替代”的支架，此外，作為細(xì)胞外基質(zhì)，生物相容性良好，可誘導(dǎo)組織再生。

現(xiàn)有的豬膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)多是通過化學(xué)試劑進(jìn)行脫細(xì)胞處理，存在抗原去除不徹底、化學(xué)試劑用量較大等缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

為克服現(xiàn)有動(dòng)物膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)在制備以及應(yīng)用中存在的缺陷，本發(fā)明的目的是提供一種動(dòng)物膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的制備方法。

本發(fā)明的另一目的是提供一種動(dòng)物膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)及其應(yīng)用。

本發(fā)明提供的動(dòng)物膀胱脫細(xì)胞基質(zhì)的制備方法為：取動(dòng)物膀胱的粘膜下層，經(jīng)過病毒滅活步驟、脫脂步驟以及脫細(xì)胞步驟制得，所述脫細(xì)胞步驟包括多次凍融步驟以及所述多次凍融步驟之后的脫細(xì)胞溶液脫細(xì)胞步驟，其中，所述凍融步驟中，冷凍溫度為-70℃～-90℃，冷凍時(shí)間為5～15小時(shí)。

本發(fā)明提供的制備方法中，所述脫細(xì)胞溶液脫細(xì)胞步驟中，所述脫細(xì)胞溶液包含質(zhì)量濃度為0.01％～0.2％的胰酶、質(zhì)量濃度為0.1％～1.0％的硫酸銨以及質(zhì)量濃度為0.01％～0.2％的脫脂劑，所述粘膜下層與所述脫細(xì)胞溶液的質(zhì)量比為1:6～1:10，所述粘膜下層浸泡于所述脫細(xì)胞溶液中10～60分鐘。

本發(fā)明提供的制備方法中，所述脫脂劑選自平平加、Triton X-100、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚中的一種。

本發(fā)明提供的制備方法中，所述多次凍融步驟于所述病毒滅活步驟之前進(jìn)行，或穿插于所述病毒滅活步驟、脫脂步驟之間進(jìn)行。

本發(fā)明提供的制備方法中，所述病毒滅活步驟為將所述粘膜下層置于病毒滅活溶液中浸泡10～60分鐘，所述粘膜下層與所述病毒滅活溶液的質(zhì)量比為1:6～1:10，所述病毒滅活溶液包含質(zhì)量濃度為0.01％～0.2％的過氧乙酸和質(zhì)量濃度為0.1％～1.0％的氯化鈉。

本發(fā)明提供的制備方法中，所述脫脂步驟為將所述粘膜下層置于脫脂溶液中10～60分鐘，所述粘膜下層與所述脫脂溶液的質(zhì)量比為1:6～1:10，所述脫脂溶液包含質(zhì)量濃度為0.1％～1.0％的純堿、質(zhì)量濃度為0.1％～1.0％的燒堿以及質(zhì)量濃度為0.01％～0.2％的脫脂劑；其中，所述脫脂劑選自平平加、Triton X-100、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚中的一種。