[發明專利]動物膀胱脫細胞基質的制備方法、所得的基質及應用

有效

• 申請號: 201610342041.8
• 申請日: 2016-05-20
• 公開（公告）號: CN107397978B
• 公開（公告）日: 2020-10-16
• 發明（設計）人: 張國強;柳軼男;楊新廣;董驤
• 申請（專利權）人: 北京納通科技集團有限公司
• 主分類號: A61L27/36
• 分類號: A61L27/36
• 代理公司: 北京律智知識產權代理有限公司 11438
• 代理人: 王瑩;于寶慶

1.一種動物膀胱脫細胞基質的制備方法，取動物膀胱的粘膜下層，經過病毒滅活步驟、脫脂步驟以及脫細胞步驟制得，其特征在于，所述脫細胞步驟包括多次凍融步驟以及所述多次凍融步驟之后的脫細胞溶液脫細胞步驟，其中，所述凍融步驟中，冷凍溫度為-70℃～-90℃，冷凍時間為5～15小時；

其中，如下獲取動物膀胱的粘膜下層：將膀胱組織置于-80℃超低溫冰箱中進行深低溫冷凍5小時以上，將深低溫冷凍的膀胱組織復溫后注入純化水，緊固端部并使水壓力逐步增大，直至粘膜層出現裂紋，再鈍性刮去粘膜層，并只保留粘膜下層；

所述脫細胞溶液脫細胞步驟中，所述脫細胞溶液包含質量濃度為0.01％～0.2％的胰酶、質量濃度為0.1％～1.0％的硫酸銨以及質量濃度為0.01％～0.2％的脫脂劑，所述粘膜下層與所述脫細胞溶液的質量比為1:6～1:10，所述粘膜下層浸泡于所述脫細胞溶液中10～60分鐘；

所述多次凍融步驟穿插于所述病毒滅活步驟、脫脂步驟之間進行；

所述制備方法還包括去除DNA/RNA步驟，其為將所述粘膜下層置于DNA酶溶液和RNA酶溶液中浸泡20～60分鐘。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述脫脂劑選自平平加、Triton X-100、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚中的一種。

3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述病毒滅活步驟為將所述粘膜下層置于病毒滅活溶液中浸泡10～60分鐘，所述粘膜下層與所述病毒滅活溶液的質量比為1:6～1:10，所述病毒滅活溶液包含質量濃度為0.01％～0.2％的過氧乙酸和質量濃度為0.1％～1.0％的氯化鈉。

4.根據權利要求2所述的制備方法，其特征在于，所述病毒滅活步驟為將所述粘膜下層置于病毒滅活溶液中浸泡10～60分鐘，所述粘膜下層與所述病毒滅活溶液的質量比為1:6～1:10，所述病毒滅活溶液包含質量濃度為0.01％～0.2％的過氧乙酸和質量濃度為0.1％～1.0％的氯化鈉。

5.根據權利要求1-4任一項所述的制備方法，其特征在于，所述脫脂步驟為將所述粘膜下層置于脫脂溶液中10～60分鐘，所述粘膜下層與所述脫脂溶液的質量比為1:6～1:10，所述脫脂溶液包含質量濃度為0.1％～1.0％的純堿、質量濃度為0.1％～1.0％的燒堿以及質量濃度為0.01％～0.2％的脫脂劑；其中，所述脫脂劑選自平平加、Triton X-100、十二烷基氨基丙酸鈉、脂肪醇聚氧乙烯醚中的一種。

6.根據權利要求1-4任一項所述的制備方法，其特征在于，所述制備方法在所述脫細胞步驟之后還包括冷凍干燥步驟以及滅菌步驟，其中，所述滅菌步驟采用劑量為15～30KGy/h的⁶⁰Co輻照滅菌。