[發明專利]用于擴增人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的PCR引物及應用

有效

• 申請號: 201610334650.9
• 申請日: 2016-05-18
• 公開（公告）號: CN105779636B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 張巨永;陳紹宇;黎美燕
• 申請（專利權）人: 廣州安必平醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6869;C12N15/11;C40B50/06
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中;萬志香

1.一種用于擴增人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的PCR引物，其特征在于，包括112對捕獲引物對，每對所述捕獲引物對的正向引物與反向引物的序列均由特異性序列及與所述特異性序列的5’端連接的接頭序列構成，每對所述捕獲引物對的正向引物與反向引物中的所述特異性序列分別為SEQ ID NO.m與SEQ ID NO.(m+112)，其中m為1、2、3……112；

所述捕獲引物對的正向引物中的接頭序列如SEQ ID NO.225所示，所述捕獲引物對的反向引物中的接頭序列如SEQ ID NO.226所示；

所述引物還包括測序引物對，所述測序引物對的正向引物由序列如SEQ ID NO.227～SEQ ID NO.234所示的引物構成，所述測序引物對的反向引物由序列如SEQ ID NO.235～SEQ ID NO.246所示的引物構成。

2.如權利要求1所述的用于擴增人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的PCR引物，其特征在于，包括112對所述捕獲引物對，112對所述捕獲引物對之間組合構成多重引物組合，所述PCR引物包括如下7組多重引物組合：第一組由序列為：SEQ ID NO.13與125、25與137、77與189、18與130、9與121、91與203、97與209、3與115、108與220、64與176、103與215、93與205、68與180、98與210、59與171以及104與216的捕獲引物對構成；

第二組由序列為：SEQ ID NO.37與149、111與223、10與122、26與138、20與132、86與198、7與119、61與173、74與186、24與136、39與151、42與154、44與156、109與221、105與217以及2與114的捕獲引物對構成；

第三組由序列為：SEQ ID NO.95與207、112與224、83與195、19與131、28與140、41與153、53與165、17與129、30與142、71與183、22與134、6與118、11與123、106與218、60與172以及94與206的捕獲引物對構成；

第四組由序列為：SEQ ID NO.36與148、14與126、57與169、5與117、21與133、16與128、87與199、27與139、23與135、45與157、40與152、92與204、110與222、89與201、65與177以及34與146的捕獲引物對構成；

第五組由序列為：SEQ ID NO.50與162、69與181、29與141、51與163、32與144、63與175、75與187、81與193、66與178、55與167、79與191、84與196、72與184、1與113、43與155以及47與159的捕獲引物對構成；

第六組由序列為：SEQ ID NO.49與161、12與124、76與188、38與150、56與168、52與164、62與174、102與214、90與202、31與143、15與127、107與219、8與120、35與147、99與211以及46與158的捕獲引物對構成；

第七組由序列為：SEQ ID NO.82與194、70與182、88與200、85與197、78與190、4與116、58與170、80與192、101與213、48與160、54與166、96與208、100與212、33與145、73與185以及67與179的捕獲引物對構成。

3.一種檢測試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1或2所述的用于擴增人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的PCR引物。

4.一種非診斷目的的捕獲人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的方法，其特征在于，包括如下步驟：

以提取的人基因組DNA為模板，以如權利要求1或2所述的PCR引物中捕獲引物對為引物進行PCR擴增，得到含有人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2全長編碼序列的PCR產物文庫。

5.如權利要求4所述的捕獲人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的方法，其特征在于，是從人外周血、人體各組織和/或口腔脫落細胞中使用純化柱提取和/或磁珠提取的方法提取人基因組DNA。