[發明專利]用于擴增人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的PCR引物及應用

有效

• 申請號: 201610334650.9
• 申請日: 2016-05-18
• 公開（公告）號: CN105779636B
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 張巨永;陳紹宇;黎美燕
• 申請（專利權）人: 廣州安必平醫藥科技股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12Q1/6869;C12N15/11;C40B50/06
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 林青中;萬志香

本發明涉及一種基于NGS技術的人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的PCR引物及應用。該人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的PCR引物，包括至少一對捕獲引物對，每對所述捕獲引物對的正向引物與反向引物的序列均包括特異性序列及與所述特異性序列的5’端連接的接頭序列。該基于NGS技術的用于擴增人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的PCR引物及應用，整個方法所涉及的實驗操作簡單、只涉及PCR試劑及引物組合、成本低，同時引入雙標簽測序接頭序列用于區分不同的樣本，可實現高通量樣本測序檢測，能有效地對人乳腺癌及其它BRCA易感基因相關遺傳性腫瘤風險評估或者針對BRCA突變的靶向用藥提供基因檢測支持。

技術領域

本發明涉及醫學分子生物學領域，尤其是涉及一種用于擴增人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的PCR引物及應用。

背景技術

乳腺癌是女性最常見的癌癥。據《2012中國腫瘤登記年報》數據顯示，我國每年乳腺癌新發病例約22萬，占到全世界乳腺癌新增病例(150萬)的15％。在女性所有惡性腫瘤中，乳腺癌發病率高達16.8％，約每10萬人中有43人發病，并且發病年齡呈現年輕化、發病率呈上升趨勢。發病率在25歲時迅速上升，在50歲時達到高峰。因此，乳腺癌的高發病率已經嚴重威脅我國女性健康。

家族遺傳性乳腺癌占到所有乳腺癌發病的10％～30％。在迄今為止已經發現的乳腺癌易感基因中，BRCA1和BRCA2是最直接的易感基因，這兩個基因突變導致的乳腺癌占到家族性乳腺癌的5％～10％。BRCA1基因定位于17q21，包含24個外顯子，編碼1863個氨基酸；BRCA2基因定位于13q12-13，包含27個外顯子，編碼蛋白含3418個氨基酸。BRCA1和BRCA2抑制細胞生長、參與細胞周期調控、DNA損傷修復及細胞凋亡等多種重要細胞功能，在維持基因組穩定性中起很重要的作用。如果BRCA1/2基因的發生突變，那么它所具有的抑制腫瘤發生的功能就會受影響。BRCA1/2基因還是卵巢癌易感基因。據統計BRCA1基因突變攜帶者一生患乳腺癌和卵巢癌的風險分別是50％～85％和15％～45％；BRCA2基因突變攜帶者患乳腺癌和卵巢癌的風險分別是50％～85％和10％～20％。BRCA1/2突變還與胰腺癌、惡性黑色素瘤有關，并且與男性前列腺癌風險也有關。因此，美國國家癌癥研究所發布的《BRCA1 andBRCA2:Cancer Risk and Genetic Testing》指南指出：先對家族中罹患乳腺癌或卵巢癌的患者進行基因檢測，如果發現該患者帶有有害的BRCA1或BRCA2基因突變，那么家族中的其它成員可再進行基因檢測，觀察是否也有存在有害突變，此種做法有很高的臨床價值。

BRCA1編碼區已經發現有幾百種突變，而BRCA2的突變多達上千種。針對BRCA1、BRCA2基因檢測技術，傳統的Sanger測序是主要的檢測手段。從檢測靈敏度上講，Sanger測序一般只能檢測20％以上突變率的變異，對BRCA1、BRCA2全部編碼序列檢測來說，檢測通量比較低、周期較長，單樣本檢測費用也較高。隨著新一代測序(NGS)技術的成熟及測序成本的持續降低，NGS取代Sanger測序技術進行乳腺癌BRCA基因檢測是未來市場的趨勢。

發明內容

基于此，有必要提供一種基于NGS技術的用于擴增人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的PCR引物及應用。

一種用于擴增人乳腺癌易感基因BRCA1和BRCA2編碼序列的PCR引物，包括至少一對捕獲引物對，每對所述捕獲引物對的正向引物與反向引物的序列均包括特異性序列及與所述特異性序列的5’端連接的接頭序列，每對所述捕獲引物對的正向引物與反向引物中的所述特異性序列分別為SEQ ID NO.m與SEQ ID NO.(m+112)，其中m為1、2、3……或112。