[發明專利]一種細菌表面ABO血型抗原的檢測方法

有效

• 申請號: 201610333057.2
• 申請日: 2016-05-19
• 公開（公告）號: CN105785055B
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發明（設計）人: 翟婭菲;陳敏;王鵬;相啟森;申瑞玲;吳其征
• 申請（專利權）人: 鄭州輕工業學院
• 主分類號: G01N33/80
• 分類號: G01N33/80
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 張紹琳;張真真

1.一種細菌表面ABO血型抗原的檢測方法，其特征在于：通過細菌固定化處理并利用人的ABO血型天然抗體與細菌表面多糖相互作用，以多功能酶標儀實現細菌表面ABO血型抗原的檢測；所述細菌指革蘭氏陰性的所有同一種類的細菌、革蘭氏陽性的所有同一種類的細菌或分離的腸道菌群；所述ABO血型天然抗體來源于鼠的或IgM型抗血型B物質抗體；

所述檢測方法的步驟如下：

（1）腸道菌群的分離提取；

（2）菌體的固定；

（3）菌體表面ABO血型抗原活性的檢測；

所述菌體的固定步驟為：

1）將從糞便樣品中分離的菌體分別用1 mL PBS重懸后，加入4 mL的Karnovsky溶液，充分混勻，在4℃下放置30 min；

2）在其中加入25 mL PBS混勻，7 000 rpm離心7 min；

3）棄去上清后迅速用含有6%BSA的PBS溶液充分重懸，確保重懸液中無顆粒狀物質；

4）將重懸液轉移至干凈的1.5 mL離心管中后放置3 min，隨后7 000 rpm離心7 min；

5）棄去上清后，用含有0.6% BSA的PBS溶液充分重懸，并確保重懸液中無顆粒狀物質，7000 rpm離心7 min；

6）重復步驟5）一次，最后將菌體用1 mL PBS重懸并保存在4℃下。