[發明專利]一種細菌表面ABO血型抗原的檢測方法

有效

• 申請號: 201610333057.2
• 申請日: 2016-05-19
• 公開（公告）號: CN105785055B
• 公開（公告）日: 2018-05-22
• 發明（設計）人: 翟婭菲;陳敏;王鵬;相啟森;申瑞玲;吳其征
• 申請（專利權）人: 鄭州輕工業學院
• 主分類號: G01N33/80
• 分類號: G01N33/80
• 代理公司: 鄭州優盾知識產權代理有限公司 41125
• 代理人: 張紹琳;張真真

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種細菌表面的ABO血型抗原的檢測方法。所述檢測方法基于細菌表面多糖的結構與人類ABO血型抗原相似而具有血型物質活性的特點，通過細菌固定化處理并利用人的ABO血型天然抗體與細菌表面多糖相互作用，以多功能酶標儀實現細菌表面ABO血型抗原的檢測。利用本發明提供的細菌表面ABO血型抗原的檢測方法，簡單易操作，穩定性好，能夠實現大批量檢測，克服了之前的檢測方法需靠肉眼觀察凝集情況的弊端，結果更直觀可靠，具有極大的應用前景。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種細菌表面的ABO血型抗原的檢測方法。

技術背景

ABO血型系統包含A、B、O和AB型四種血型，其血型抗原的本質是糖蛋白和糖脂，血型是由糖鏈末端的組成和結構決定的。O型血人的血紅細胞(RBC)表面表達H抗原(GlcNAc-β1,4-Gal-α1,2-Fuc)；B型RBC含B抗原，它的非還原端在H抗原的基礎上多一個α–1,3半乳糖苷；而A型抗原較為復雜，主要分為A1和A2兩種亞型。通常提到的A型抗原指的是A2型，它比H抗原多一個α–1,3-N-乙酰半乳糖胺(α-1,3-N-GalNAc)。

細菌無處不在，在人類生存的環境中，人體口腔、皮膚、腸道等部位均分布著各種各樣的細菌。細菌表面多糖以共價或非共價的形式與細菌結合，介導細菌與宿主間的相互作用、保護細菌逃離宿主的免疫清除，有些還是細菌致病的關鍵毒力因子。由于與細菌表面連接方式的不同，細菌表面多糖可以分為三種類型：脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)、莢膜多糖(capsular polysaccharide,CPS)和胞外多糖(exo-polysaccharide,EPS)。脂多糖是革蘭氏陰性菌外膜的重要組成成分，也叫內毒素，是一種熱源和炎癥刺激因子。幾乎所有革蘭氏陰性菌的LPS結構都相同，從內到外依次為類脂A(lipid A)、核心寡糖(coreoligosaccharide)和O-多糖(O-polysaccharide,O-PS)。O-PS也叫O抗原，是由多個寡糖重復單位重復排列構成的，每個重復單位一般由3-6個單糖組成。不同細菌的O-重復單位中有不同的單糖組成，單糖間形成的糖苷鍵連接位置和立體化學構型不同并且這些重復單位間的連接方式也不同，這些特性使得O-PS成為細胞結構中最多樣的成分之一。大腸桿菌中不同的O-PS就達180多種，由于不同的抗原性，大腸桿菌也被分為不同的O-血清型，例如E.coli O86和O157。莢膜多糖是由多個重復單元構成的線性多聚體，常被乙酰基，其它酰基，磷酸基和硫酸基修飾，同樣表現出復雜的多樣性，例如，能引起肺炎、腦膜炎和血液感染的肺炎鏈球菌就有90多種不同結構的CPS。胞外多糖是細菌分泌到細胞外的多糖，有些細菌只在生長的對數期和穩定期分泌而有些細菌則在生長的全程均可分泌EPS。EPS通常形成黏液，不與細胞直接連接，一般有大于1000個的重復單位，分子量更大。

由于細菌表面種類繁多的糖結構，不可避免的某些細菌表面多糖會與人類ABO血型抗原相同或相似。E.coli O86的O-多糖(O-PS)重復單元中非還原端三糖Gal-α1,3-(L-Fuc-α1,2)-Gal與人血型B抗原組成和結構相同，當腸道功能失調的人攝入E.coli O86后，80％的O型或者A型個體中anti-B抗體明顯提高；并且當雞攝入E.coli O86后，其體內將會產生anti-B抗體。此外，血型凝集素也能在一定程度上抑制甚至殺死擁有血型物質活性的細菌。人體腸道菌群表面也存在多種多樣的糖結構，人體內的ABO血型抗體是否對人體腸道內的菌群產生影響仍有待研究。

早期有實驗室用間接免疫抑制實驗檢測了一些革蘭氏陰性菌，發現有近一半的檢測細菌中存在能與人類血型抗體發生免疫反應的抗原。但該檢測方法耗時費力，需要依靠人的肉眼觀察判定結果，且只能檢測單一細菌的表面血型抗原。而檢索發現，能大批量檢測細菌表面ABO血型抗原的方法未見報道，而關于人體腸道菌群表面的ABO血型抗原檢測方法更未見報道。基于此，亟待建立和開發新的可以準確批量檢測細菌表面ABO血型抗原的方法。