[發明專利]一種用于制備依折麥布中間體的固定化酶及其制備方法

有效

• 申請號: 201610332445.9
• 申請日: 2016-05-19
• 公開（公告）號: CN105754983B
• 公開（公告）日: 2018-11-23
• 發明（設計）人: 馮文亮;王靜
• 申請（專利權）人: 河北周酶生物科技有限公司
• 主分類號: C12N11/02
• 分類號: C12N11/02;C12P17/14
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種用于制備依折麥布中間體的固定化酶，其由酮基還原酶或羰基還原酶以吸附、共價結合、包埋、微囊化或交聯的固定方式固定于固定化酶載體中制備而成，其中，所述酮基還原酶占所述固定化酶載體的質量百分比為0.01%~5%。本發明的固定化酶與液酶相比，降低生產成本和勞動強度，提高酶的利用效率和產品質量，減少三廢排放，綠色環保。

技術領域

本發明屬于醫藥化工領域，具體的涉及一種用于制備依折麥布中間體(4S)-3-[(5S)-5-(4-氟苯基)-5-羥基戊酰基]-4-苯基-1,3-氧氮雜環戊烷-2-酮的固定化酶，本發明還涉及所述固定化酶的制備方法和應用。

背景技術

依折麥布是由先靈葆雅制藥公司(Schering-Plough)和默克公司(Merck)聯合開發的新型膽固醇吸收抑制劑，是第一個獲得美國FDA批準上市的膽固醇吸收選擇性抑制劑類藥物，商品名：“益適純”（EZETROL），化學名（3R,4S）-1-(4-氟苯基)-3-[(3S)-3-(4-氟苯基)-3-羥丙基]-4-(4-羥苯基)-2-氮雜環丁酮。

其作用機制是抑制來源于食物的腸內膽固醇吸收，降低小腸中的膽固醇向肝臟中的轉動，降低血漿膽固醇水平，可應用于各型高脂血癥，尤其適用于對他汀類藥物效果不佳或不能耐受的病人，以及一些遺傳性和藥源性高脂血癥患者。2015年默沙東市場銷售額25.2億美元，目前已成為降血脂藥物市場上的重磅炸彈藥物，市場前廣闊。專利2016年到期，開發生產該藥物將有重要的社會效益及巨大的經濟效益。

(4S)-3-[(5S)-5-(4-氟苯基)-5-羥基戊酰基]-4-苯基-1,3-氧氮雜環戊烷-2-酮是制備依折麥布（Ezetimibe）藥物的關鍵手性中間體。目前，利用還原法生產(4S)-3-[(5S)-5-(4-氟苯基)-5-羥基戊酰基]-4-苯基-1,3-氧氮雜環戊烷-2-酮的方法可分為化學法和生物法，其中化學法生產會產生少量的異構體影響成品的產品質量；生物法以其所具有的反應條件溫和，立體專一性強、轉化率高等特點被廣泛地研究和應用。然而，目前生物法生產該中間體大多利用液酶進行反應，與使用固定化酶相比，每批反應必須換用新的酶液，分離困難，操作繁瑣，且降低了酶的利用效率，廢液不可回收，產生大量三廢污染物，同時產品中可能含有蛋白等菌體雜質。

固定化酶技術的發展已有100多年的歷史，到上個世紀70年代末，該技術已經較為成熟，可選擇的固定化方法有包埋法、微囊化法、共價連接法、吸附法或組合方法，可選擇的載體有無機載體或有機載體、天然載體或合成載體、有孔載體或無孔載體，可以優選的固定化條件有水相、有機溶劑、pH、溫度等。隨著科學技術的發展，固定化酶的技術也再不斷的進步，通過固定化載體、固定化方法和酶的不斷改進，提高了許多不具有工業化應用酶的性能，使其具有更高的選擇性、活力和耐用性，能夠體現出與以往液酶生產無法比擬的技術優勢。通過固定化酶的使用，方便了反應混合物的分離，反應器設計較靈活，適用于多種不同反應介質和反應系統，方便過程開發和下游處理，尤其便于過程控制。

到目前為止，對于依折麥布中間體的制備，還沒有合適的固定化酶產品應用于生產，對于該反應所特定需要的固定化酶的生產工藝條件摸索也是空白。

發明內容

本發明的目的在于提供一種易于從反應混合液中分離，可重復使用，有效降低工業三廢產生，提高生產效率的用于制備依折麥布中間體的固定化酶。

為達到本發明目的，發明人所提供的技術方案為：

一種用于制備依折麥布中間體的固定化酶，其由酮基還原酶或羰基還原酶以吸附、共價結合、包埋、微囊化或交聯的固定方式固定于固定化酶載體中制備而成，其中，所述酮基還原酶占所述固定化酶載體的質量百分比為0.01%~5%。

本發明中酮基還原酶又稱酮還原酶（Ketoreductase），羰基還原酶類號為EC1.1.1.184。