[發(fā)明專利]卡非佐米中手性異構體的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610329394.4
• 申請日: 2016-05-18
• 公開（公告）號: CN107402259B
• 公開（公告）日: 2020-10-13
• 發(fā)明（設計）人: 李海霞;何麗娟;張紅芬;郭文敏;劉娜;劉靜媛;白培鋒
• 申請（專利權）人: 石藥集團中奇制藥技術（石家莊）有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明涉及一種檢測卡非佐米中3種手性異構體(對映異構體、非對映異構體F和G)的正相高效液相色譜檢測方法，所述正相高效液相色譜法采用以纖維素?三(4?氯?3?甲基苯基氨基甲酸酯)鍵合硅膠為填充劑的色譜柱；流動相為正己烷?異丙醇?乙醇，正己烷?異丙醇?乙醇的體積比為(87～91):(6～4):(7～5)，該檢測方法靈敏度高、專屬性好、準確度高、耐用性好，可有效控制卡非佐米的質量。

技術領域

本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體涉及一種檢測卡非佐米中3種手性異構體的正相高效液相色譜檢測方法。

背景技術

卡非佐米(Carfilzomib)是經靜脈給藥的第二代蛋白酶體抑制劑，具有良好的抗腫瘤活性，用于治療預先接受過至少2種藥物治療(包括第一代蛋白酶體抑制劑和一種免疫調節(jié)劑)，并有證據(jù)顯示在完成末次治療后60天內疾病惡化的難治性多發(fā)性骨髓瘤，于2012年7月20日由FDA批準上市，商品名：Kyprolis，其化學結構式如下式所示：

目前，卡非佐米檢測手性異構體的分析方法未見文獻報道。

卡非佐米含有5個手性中心，具有1個對映異構體和30個非對映異構體，不同的手性異構體藥理活性和毒性可能會產生較大差別，卡非佐米中可能含有如此多的手性異構體，若不能對其含量進行嚴格控制，會影響卡非佐米的質量，進而可能會影響卡非佐米的藥理活性，給患者帶來安全隱患。

因此，建立靈敏度高、專屬性好、準確度高、耐用性好的手性異構體檢測方法，對卡非佐米的質量控制和患者用藥安全性具有重要意義。

發(fā)明內容

本發(fā)明的目的是提供一種檢測卡非佐米中手性異構體的正相高效液相色譜檢測方法。

本發(fā)明人根據(jù)合成產物產生概率推算，得出絕大部分非對映異構體不會產生或者產生概率可以忽略不計，因此，僅研究卡非佐米的對映異構體和4個非對映異構體，即可實現(xiàn)其手性異構體的有效控制，保障卡非佐米的用藥安全。卡非佐米的對映異構體和4個非對映異構體的具體結構如下：

本發(fā)明人首先嘗試采用反相液相色譜，此時需要分析的除上述5個手性異構體外，還有9個雜質。色譜柱采用常規(guī)的ODS-C18(4.6×250mm，5μm)，流動相在等度條件(50：50)下先后嘗試了甲醇和水、乙腈和水、甲醇和0.05％～0.2％醋酸溶液、甲醇和0.05％～0.15％三氟乙酸溶液、乙腈和0.05％～0.2％醋酸溶液、乙腈和0.05％～0.15％三氟乙酸溶液，甲醇和磷酸鹽緩沖溶液，乙腈和磷酸鹽緩沖溶液，發(fā)現(xiàn)在乙腈-0.05％三氟乙酸溶液的流動相體系中，基線噪音較低且主峰分離效果相對較好，但無論如何調整流動相比例，大多數(shù)雜質無法實現(xiàn)基本分離，后采用此流動相又嘗試了各種梯度洗脫方式，但由于所研究的雜質個數(shù)(包括手性異構體)較多，將卡非佐米及其所有雜質均實現(xiàn)基本分離非常困難，經過多次摸索最終開發(fā)了一種能分析出盡可能多的雜質的梯度洗脫檢測方法，這種檢測方法能使卡非佐米與相鄰雜質峰之間、大多數(shù)雜質峰與雜質峰之前能達到基線分離，但是對映異構體、非對映異構體F和非對映異構體G對其它色譜峰有干擾(非對映異構體F與某雜質重合，非對映異構體G與某雜質重合，對映異構體和卡非佐米重合)。

本發(fā)明人后續(xù)考慮采用正相液相色譜對卡非佐米中對映異構體、非對映異構體F和G進行單獨的質量控制，先后嘗試了以纖維素-三(3,5-二甲苯基氨基甲酸酯)為固定相的手性色譜柱(如CHIRALCEL OD-H手性色譜柱，4.6mm×250mm，5μm)和以直鏈淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)為固定相的手性色譜柱(如CHIRALCEL AY-H手性色譜柱，4.6mm×250mm，5μm)，無論調換流動相等色譜條件，都無法進行分離后，又嘗試了以纖維素-三(4-氯-3-甲基苯基氨基甲酸酯)鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(如CHIRALCEL OX-H色譜柱和CHIRALCEL OX-3色譜柱等)，并調整了大量不同的流動相系統(tǒng)，做出了本發(fā)明。