[發明專利]一種脂肪酶催化在線合成5′-O-乙烯己二酰尿苷的方法

有效

• 申請號: 201610326588.9
• 申請日: 2016-05-17
• 公開（公告）號: CN107384991B
• 公開（公告）日: 2020-11-13
• 發明（設計）人: 杜理華;成柄灼;徐亮亮;羅錫平
• 申請（專利權）人: 浙江工業大學
• 主分類號: C12P19/38
• 分類號: C12P19/38;C12M1/40;C12M1/00
• 代理公司: 杭州天正專利事務所有限公司 33201
• 代理人: 黃美娟;俞慧

本發明公開了一種脂肪酶催化在線合成5'?O?乙烯己二酰尿苷的方法。所述方法包括：以體積比為1:8～16的二甲亞砜和叔戊醇為反應溶劑，以摩爾比為1:5～13的尿苷與己二酸二乙烯酯為原料，以0.5～1.0g脂肪酶Lipozyme TLIM為催化劑，將原料和反應溶劑置于注射器中，將脂肪酶Lipozyme TLIM均勻填充在微流控通道反應器的反應通道中，在注射泵的推動下使原料和反應溶劑連續通入反應通道器中進行酰化反應，所述微流控通道反應的反應通道內徑為0.8～2.4mm，反應通道長為0.5～1.0m；控制酯化反應溫度為15～50℃，酯化反應時間為20～35min，通過產物收集器在線收集反應液，反應液經常規后處理得到5'?O?乙烯己二酰尿苷。本發明具有反應時間短、選擇性高及產率高的優點。

(一)技術領域

本發明涉及一種脂肪酶催化在線可控選擇性合成5'-O-乙烯己二酰尿苷的方法。

(二)背景技術

核苷類藥物在病毒性疾病的治療中占有重要的地位。目前臨床上使用的抗病毒藥物中，核苷類藥物所占比重達60％以上。大多數核苷類化合物為多羥基化合物，存在極性較高、腸道通透性較低，脂溶性差、毒副作用大以及口服生物利用度較低等缺陷。核苷類化合物通過酯化修飾后，可增強其脂溶性，提高藥理活性，提高其口服生物利用度。在通常的化學法酯化過程中，多個羥基都有可能參與酯化，產物為單酯及多酯的混合物，因而需經“基團保護-酯化-脫保護基團”三步才能獲得單一位置酯化的產物。而酶對底物有良好的專一性和選擇性，可以選擇性對核苷的某個羥基進行酯化，反應選擇性較高，減少了產物后續分離的困難，因此生物催化技術在核苷類化合物的酯化中扮演著越來越重要的角色。

微流控學(Microfluidics)是在微米級結構中操控納升至皮升體積流體的技術與科學，是近十年來迅速崛起的新交叉學科。當前，微流控學的發展已大大超越了原來的主要為分析化學服務的目的，而正在成為整個化學學科、生命科學、儀器科學乃至信息科學新一輪創新研究的重要技術平臺。

自1997年Harrison課題組發表了首篇在微流控芯片微反應器中合成化合物的文獻后，微流控芯片反應器已成功地用于多種有機合成反應，并展示了廣泛的應用前景。隨著微流控芯片中微混合、微反應技術的發展，在芯片中進行合成反應已經成為微流控芯片領域的研究熱點之一。

同常規化學反應器相比，微通道反應器不僅具有使反應物間的擴散距離大大縮短，而且傳質速度快；反應物配比、溫度、反應時間和流速等反應條件容易控制，副反應較少；需要反應物用量甚微，不但能減少昂貴、有毒、有害反應物的用量，反應過程中產生的環境污染物也極少，是一種環境友好、合成研究新物質的技術。

目前，有較多的國內外學者對有機介質中核苷酰化反應的酶催化合成進行了研究，但是該方法多選用酰化酶進行催化，往往需要較長的反應時間(12-24h)，且反應的轉化率與選擇性不高，因此我們研究了微通道反應器中脂肪酶催化在線合成5'-O-乙烯己二酰尿苷的方法，旨在尋找一種高效環保的5'-O-乙烯己二酰尿苷的在線可控選擇性合成方法。

(三)發明內容

本發明要解決的技術問題是提供一種微流控通道反應器中脂肪酶催化在線合成5'-O-乙烯己二酰尿苷的新工藝，具有反應時間短、產率高、選擇性好的優點。

為解決上述技術問題，本發明采用如下技術方案：