[發明專利]一種東方蜜蜂微孢子蟲的LAMP檢測引物及其檢測試劑盒在審
| 申請號： | 201610312738.0 | 申請日： | 2016-05-12 |
| 公開（公告）號： | CN105755158A | 公開（公告）日： | 2016-07-13 |
| 發明（設計）人： | 梁勤;席偉軍;李江紅;陳大福;郭睿 | 申請（專利權）人： | 福建農林大學 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 福州元創專利商標代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡學俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 國省代碼： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 東方 蜜蜂 孢子 lamp 檢測 引物 及其 試劑盒 | ||
1.一種東方蜜蜂微孢子蟲的LAMP檢測引物，其特征在于：所述引物包括一對外引物Nosc-F3/Nosc-B3和一對內引物Nosc-FIP/Nosc-BIP，所述引物的核苷酸序列分別如SEQIDNO.1～4所示。
2.如權利要求1所述東方蜜蜂微孢子蟲的LAMP檢測引物組在制備東方蜜蜂微孢子蟲檢測試劑盒中的應用。
3.如權利要求2所述的應用，其特征在于，所述試劑盒還包括2×反應緩沖液、陽性對照品、陰性對照品、顯色液、BstDNA聚合酶、滅菌去離子水。
4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述2×反應緩沖液的組分包括如下：40mM、pH8.8Tris-HCl；0.2wt.%Tween20；20mMKCl；20mM（NH4）2SO4；8mMMgSO4；2.0mMdNTPs。
5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述陽性對照品為東方蜜蜂微孢子蟲DNA或含有東方蜜蜂微孢子蟲RPB1基因片段的重組質粒；所述陰性對照品為正常蜜蜂腸道組織DNA。
6.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，所述顯色液為鈣黃綠素。
7.根據權利要求2～6任一所述的應用，其特征在于，所述試劑盒的反應體系如下：當檢測結果的判定采用染色法或瓊脂糖凝膠電泳法時，反應體系為：
2×反應緩沖液12.5μL；
引物Nosc-F3/Nosc-B30.5μL；
引物Nosc-FIP/Nosc-BIP3.5μL；
BstDNA聚合酶8U/μL1.0μL；
樣品DNA1.0μL；
去離子水2.5μL；
或當檢測結果的判定采用實時熒光法時，反應體系為：
2×反應緩沖液12.5μL；
引物Nosc-F3/Nosc-B30.5μL；
引物Nosc-FIP/Nosc-BIP3.5μL；
BstDNA聚合酶8U/μL1.0μL；
樣品DNA1.0μL；
去離子水1.5μL；
熒光檢測試劑1.0μL；
其中，所述引物Nosc-F3/Nosc-B3為5pmol，引物Nosc-FIP/Nosc-BIP為35pmol。
8.根據權利要求2～6任一所述的應用，其特征在于，所述試劑盒的LAMP反應條件為：57℃恒溫反應40～70min；然后在80～90℃放置5min滅活BstDNA聚合酶終止反應。
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