[發(fā)明專利]一種將單磺酸四氮唑鹽用于檢測(cè)細(xì)胞活力的用途及方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610310459.0
• 申請(qǐng)日: 2016-05-11
• 公開（公告）號(hào): CN107365827A
• 公開（公告）日: 2017-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 阮奔放;阮健昵福
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 杭州健昵福生物科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/04
• 分類號(hào): C12Q1/04;C12Q1/02
• 代理公司: 浙江英普律師事務(wù)所33238
• 代理人: 陳小良,王炎軍

1.一種將單磺酸四氮唑鹽用于檢測(cè)細(xì)胞活力的用途，其特征在于：所述的單磺酸四氮唑鹽化學(xué)式為：

2.一種細(xì)胞活力的檢測(cè)方法，其特征在于：所述的檢測(cè)方法包括如下步驟：

步驟一、在培育好的含待測(cè)細(xì)胞的培養(yǎng)基中加入單磺酸四氮唑鹽檢測(cè)試劑，培育1小時(shí)以上；

步驟二、在450±20nm處測(cè)定其吸光度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線；通過(guò)觀察待測(cè)細(xì)胞的劑量響應(yīng)對(duì)細(xì)胞活力進(jìn)行評(píng)價(jià)。

所述的單磺酸四氮唑鹽檢測(cè)試劑包括單磺酸四氮唑鹽或含有培養(yǎng)基的單磺酸四氮唑鹽與1-methoxy PMS。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種細(xì)胞活力的檢測(cè)方法，其特征在于：所述的單磺酸四氮唑鹽的濃度為0.1～10mM，1-methoxy PMS的濃度為5～25μM。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種細(xì)胞活力的檢測(cè)方法，用于對(duì)哺乳動(dòng)物細(xì)胞活力的檢測(cè)，其特征在于所述的哺乳動(dòng)物細(xì)胞包括精子、卵母細(xì)胞、胚胎細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板、免疫細(xì)胞、心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、成骨細(xì)胞、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、肝細(xì)胞、腎細(xì)胞、腺細(xì)胞、內(nèi)分泌細(xì)胞；

包括如下步驟：

步驟一、將哺乳動(dòng)物細(xì)胞接種于盛有細(xì)胞培養(yǎng)基的透明板，接種細(xì)胞10⁴至10⁵個(gè)每ml，放入培養(yǎng)箱培育3～5小時(shí)；

步驟二、培育完成后，加入單磺酸四氮唑鹽檢測(cè)試劑孕育1小時(shí)以上，測(cè)定450nm的吸光度，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線，觀察細(xì)胞數(shù)目的劑量響應(yīng)。

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種細(xì)胞活力的檢測(cè)方法，用于對(duì)化合物對(duì)細(xì)胞毒性的檢測(cè)，其特征在于包括如下步驟：

步驟一、將待測(cè)細(xì)胞接種于盛有細(xì)胞培養(yǎng)基的透明板，接種細(xì)胞，放入培養(yǎng)箱培育3～5小時(shí)；

步驟二、培育完成后，加入一定濃度的待測(cè)化合物，孕育2～5天，加入單 磺酸四氮唑鹽檢測(cè)試劑孕育1小時(shí)以上，測(cè)定450nm的吸光度，得到EC₅₀值，通過(guò)生長(zhǎng)抑制或細(xì)胞毒性進(jìn)行細(xì)胞活力評(píng)價(jià)。

6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種細(xì)胞活力的檢測(cè)方法，用于對(duì)環(huán)境微生物檢測(cè)，其特征在于包括如下步驟：

步驟一、采集不同環(huán)境中樣品5～1000ml，高速離心富集，滅菌水稀釋1～5倍；

步驟二、加入單磺酸四氮唑鹽檢測(cè)試劑孕育0.5～4小時(shí)，測(cè)定450nm的吸光度，得到EC₅₀值。

7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種細(xì)胞活力的檢測(cè)方法，用于非哺乳類動(dòng)物細(xì)胞活力檢測(cè)，其特征在于所述的細(xì)菌包括乳酸菌、硝化細(xì)菌、大腸桿菌、肺炎雙球菌，各類細(xì)胞結(jié)構(gòu)生物放線菌，藍(lán)藻包括顫藻、籃球藻、念珠藻，絕大多數(shù)單細(xì)胞藻類包括衣藻、綠藻，真菌包括食用菌、酵母菌、霉菌；

包括如下步驟：

步驟一、將上述細(xì)胞接種于盛有培養(yǎng)基的透明板，雙蒸水依次2倍稀釋，

步驟二、加入單磺酸四氮唑鹽檢測(cè)試劑孕育0.5～4小時(shí)，測(cè)定450nm的吸光度，進(jìn)行細(xì)胞活力評(píng)價(jià)。

8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種細(xì)胞活力的檢測(cè)方法，用于動(dòng)物組織標(biāo)本細(xì)胞活力的檢測(cè)，其特征在于包括如下步驟：

步驟一、將動(dòng)物組織用機(jī)械或消化酶處理，過(guò)篩，用無(wú)菌緩沖液釋稀，得到單個(gè)存在的動(dòng)物細(xì)胞；接種于培養(yǎng)基中，放入培養(yǎng)箱培育3～5小時(shí)，根據(jù)需要設(shè)定溫度，培育2～5天；

步驟二、加入單磺酸四氮唑鹽檢測(cè)試劑孕育1小時(shí)，測(cè)定450nm的吸光度，得到EC₅₀值，進(jìn)行細(xì)胞活力評(píng)價(jià)。

9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種細(xì)胞活力的檢測(cè)方法，用于植物組織標(biāo)本細(xì)胞活力的檢測(cè)，其特征在于包括如下步驟：

步驟一、將植物組織用果膠酶來(lái)處理，破壞植物間的胞間層，這樣就能獲得單個(gè)植物細(xì)胞；或用纖維素酶和果膠酶來(lái)處理，獲得植物細(xì)胞的原生質(zhì)體，再 培養(yǎng)出細(xì)胞壁，從而得到單個(gè)植物細(xì)胞；接種于盛有培養(yǎng)基，放入培養(yǎng)箱培育；

步驟二、加入單磺酸四氮唑鹽檢測(cè)試劑孕育1小時(shí)，測(cè)定450nm的吸光度，得到EC₅₀值，進(jìn)行細(xì)胞活力評(píng)價(jià)。

10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種細(xì)胞活力的檢測(cè)方法，用于對(duì)病變細(xì)胞的NADH和NADPH含量變化的檢測(cè)。