[發(fā)明專利]一種利用畢赤酵母高效分泌表達(dá)轉(zhuǎn)肽酶Sortase A的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610308645.0 | 申請日： | 2016-05-11 |
| 公開（公告）號： | CN105754885B | 公開（公告）日： | 2020-01-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 吳志猛;趙鑫銳;洪皓飛;鄧濤 | 申請（專利權(quán)）人： | 江南大學(xué) |
| 主分類號： | C12N1/19 | 分類號： | C12N1/19;C12N9/52;C12R1/84 |
| 代理公司： | 23211 哈爾濱市陽光惠遠(yuǎn)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 | 代理人： | 耿曉岳 |
| 地址： | 214122 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 酵母 高效 分泌 表達(dá) 肽酶 sortase 方法 | ||
1.一種分泌表達(dá)轉(zhuǎn)肽酶SortaseA的基因工程菌，其特征在于，選擇AOX1或GAP啟動子，以畢赤酵母SMD1168為表達(dá)宿主，以pPIC9k為表達(dá)載體，構(gòu)建得到分泌表達(dá)SortaseA的基因工程菌。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，以AOX1為啟動子。
3.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述的基因工程菌生產(chǎn)轉(zhuǎn)肽酶SortaseA的方法，其特征在于，是誘導(dǎo)培養(yǎng)重組畢赤酵母使其表達(dá)轉(zhuǎn)肽酶SortaseA。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，重組畢赤酵母在BMGY培養(yǎng)基中活化；所述BMGY培養(yǎng)基含13.4g/L不含氨基酸的YNB，20g/L蛋白胨，10g/L酵母膏，10g/L甘油，100mM磷酸鹽。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的方法，其特征在于，將活化后的重組畢赤酵母轉(zhuǎn)接至初始pH6.0的BSM無機(jī)培養(yǎng)基中，28℃誘導(dǎo)產(chǎn)酶，每隔24h加入1.5％含微量元素的純甲醇進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，誘導(dǎo)培養(yǎng)72h。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述BSM無機(jī)培養(yǎng)基含26.7ml/L磷酸，0.93g/L硫酸鈣，18.2g/L硫酸鉀，14.9g/L硫酸鎂，4.13g/L氫氧化鉀，40g/L甘油；所述含微量元素的純甲醇是含CuSO4·5H2O 6.0g/L，KI 0.088g/L，MnSO4·H2O 3.0g/L，Na2MoO4·2H2O 0.2g/L，H3BO3 0.02g/L，CoCl2·6H2O 0.5g/L，ZnCl2 20.0g/L，F(xiàn)eSO4·7H2O 65.0g/L，Biotin 0.2g/L，濃H2SO4 5.0mL/L的純甲醇。
7.權(quán)利要求1所述的基因工程菌的應(yīng)用，其特征在于，所述應(yīng)用包括在生物化學(xué)、蛋白質(zhì)組學(xué)、生物醫(yī)藥或生物工程技術(shù)領(lǐng)域中的應(yīng)用，以及在制備蛋白質(zhì)或多肽的連接工具中的應(yīng)用。
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