[發明專利]一種用于檢測人源性HSP70-1基因表達水平的引物組合物及其應用

有效

• 申請號: 201610303563.7
• 申請日: 2016-05-09
• 公開（公告）號: CN107201398B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 靳令經;蔣明;于麗華;符星
• 申請（專利權）人: 上海市同濟醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 竺路玲

本發明公開了一種用于檢測人源性HSP70?1基因表達水平的引物組合物及其應用，引物組合物由引物組1和引物組2組成，引物組1用于HSP70?1基因檢測，引物組2用于RPL19內參基因檢測。本發明還涉及所述引物組合物在制備用于檢測人源性HSP70?1基因表達水平的試劑中的應用。本發明采用的技術方案，與現有技術相比，能夠特異性的檢測HSP70?1基因的表達水平，避免了同源性基因的干擾；檢測的靈敏度非常高；無需使用熒光探針，設計簡單；檢測過程準確高效，并且檢測時間短，應用前景廣闊。

技術領域

本發明屬基因技術領域，具體涉及一種用于檢測人源性HSP70-1基因表達水平的引物組合物及其應用。

背景技術

熱休克蛋白是一組在生物進化過程中高度保守的蛋白質分子家族。該家族成員根據分子量大小可分為HSP100、HSP90、HSP70、HSP60、HSP28等幾大類。HSP70是分子量在70KD左右的熱休克蛋白,是熱休克蛋白家族中最保守、最重要的一員,被稱為主要熱休克蛋白,它們由HSP70基因家族編碼，是一種非特異性細胞保護蛋白。HSP70可分為結構型HSP70和誘導型HSP70，結構型HSP70為細胞在正常狀態下即可產生的，誘導型HSP70為細胞在受到一些刺激時產生，正常細胞中僅少量表達或不表達。HSP70-1為典型的誘導型HSP70，研究表明除了因熱休克刺激而產生以外，還有很多因素(如缺血、缺氧金屬、病毒感染、組織損傷等)都可以誘導其產生，因此熱休克蛋白又稱為應激蛋白(stress protein)。

HSP70是生物體內含量最多的分子伴侶，參與細胞周期調節、DNA損傷修復及細胞凋亡，可維持細胞蛋白穩定，提高細胞對應激源的耐受性，使細胞維持正常的生理功能。通常環境中不利因素的作用會誘導機體產生應激反應和HSP70表達，因此可將HSP70的表達作為一個潛在性的環境應激和毒性的量化指標。研究表明HSP70在神經退行性疾病中也起重要作用，例如帕金森病(Parkinson Disease,PD)是一種椎體外系進行性神經退化性疾病，病理學主要表現為黑質多巴胺能神經元和紋狀體多巴胺能神經纖維的數量顯著下降。研究表明氧化應激損傷和α-突觸核蛋白神經免疫反應是導致帕金森病的主要原因，都能產生應激反應。HSP70作為分子伴侶家族中的一員,是一種重要的應激蛋白,能與錯誤折疊的蛋白相互作用，阻止聚集物的形成，并且還有助于錯誤折疊蛋白的降解，HSP70能減輕帕金森病細胞模型中α-突觸核蛋白毒性的作用因此將其用于PD的發病機制與疾病治療方面的研究。

作為熱休克蛋白家族中的重要成員，HSP70能促進腫瘤細胞的生長。HSP70在多種腫瘤組織中表達異常，與腫瘤的發生、發展、腫瘤免疫、腫瘤治療中耐藥性和腫瘤的預后等都有密切關系。正常細胞僅表達少量HSP70，HSP70參與細胞的生長代謝，并受細胞周期的嚴格調控；而腫瘤細胞即使在無應激條件下，也能持續表達高水平HSP70，并出現異常分布和定位，例如卵巢癌細胞中HSP70的表達較正常卵巢細胞高幾倍,口腔鱗癌中表達更高。Beer等的研究提示HSP70在早期肺腺癌中過表達是1個不良預后的分子標志物，因此可通過測定HSP70的表達水平研究其與疾病的發生發展的相關性，為腫瘤的診治提供更充分的理論依據。