[發明專利]一種用于檢測人源性HSP70-1基因表達水平的引物組合物及其應用

有效

• 申請號: 201610303563.7
• 申請日: 2016-05-09
• 公開（公告）號: CN107201398B
• 公開（公告）日: 2020-03-24
• 發明（設計）人: 靳令經;蔣明;于麗華;符星
• 申請（專利權）人: 上海市同濟醫院
• 主分類號: C12Q1/6883
• 分類號: C12Q1/6883;C12N15/11
• 代理公司: 上海申新律師事務所 31272
• 代理人: 竺路玲

1.一種用于檢測人源性HSP70-1基因表達水平的引物組合物，其特征在于：由引物組1和引物組2組成；所述引物組1用于HSP70-1基因檢測，所述引物組2用于RPL19內參基因檢測；所述引物組1由序列為SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的引物組成；所述引物組2由序列為SEQ ID NO:3和SEQ ID NO:4所示的引物組成；

其中，所述的引物組1和引物組2的上游和下游引物的濃度均為0.1-0.5μM。

2.根據權利要求1所述的引物組合物在制備用于檢測人源性HSP70-1基因表達水平的試劑中的應用。

3.根據權利要求1所述的引物組合物在篩選RNA干擾序列方法中的應用。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，采用2^-△△CT相對定量方法計算不同RNA干擾序列樣品的HSP70-1基因表達水平，篩選出表達水平最低的RNA干擾序列。

5.一種用于檢測人源性HSP70-1基因表達水平的試劑盒，其特征在于，包括權利要求1所述的引物組合物和熒光染料。

6.根據權利要求5所述的一種用于檢測人源性HSP70-1基因表達水平的試劑盒，其特征在于，所述的熒光染料是SYBR Green熒光染料。

7.一種非診斷治療目的的用于檢測人源性HSP70-1基因表達水平的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟1：提取樣品中RNA；

步驟2：將步驟1中提取出來的RNA反轉錄成cDNA；

步驟3：以權利要求1中所述的引物組為引物，用熒光定量PCR法檢測HSP70-1基因以及RPL19內參基因表達水平。

8.根據權利要求7所述的一種用于檢測人源性HSP70-1基因表達水平的方法，其特征在于，步驟3中熒光定量PCR反應條件為95℃預變性5min；95℃變性10s，60℃退火34s運行40個循環；最后40℃10s結束反應。