[發(fā)明專利]一種結(jié)核病基因藥物及其制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610303281.7
• 申請(qǐng)日: 2016-05-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105879058B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 范雄林
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K48/00
• 分類號(hào): A61K48/00;A61K38/19;A61P31/06;C12N15/861;C12N7/01;C12N15/19;C07K14/52
• 代理公司: 華中科技大學(xué)專利中心42201
• 代理人: 曹葆青

1.一種結(jié)核病基因藥物，其特征在于，所述結(jié)核病基因藥物以腺病毒為基因表達(dá)載體，表達(dá)細(xì)胞內(nèi)顆粒溶素蛋白以及細(xì)胞外顆粒溶素蛋白，所述細(xì)胞內(nèi)顆粒溶素蛋白以及細(xì)胞外顆粒溶素蛋白的表達(dá)量在2∶8至8∶2之間；所述的結(jié)核病基因藥物包括用于表達(dá)細(xì)胞內(nèi)顆粒溶素蛋白的第一重組腺病毒以及用于表達(dá)細(xì)胞外顆粒溶素蛋白的第二重組腺病毒；所述第一腺病毒，其重組腺病毒基因組的E1缺失區(qū)整合有用于表達(dá)細(xì)胞內(nèi)顆粒溶素蛋白的第一序列，所述第一序列為由SEQ ID No.1所示的基因序列；所述第二腺病毒，其重組腺病毒基因組的E1缺失區(qū)整合有用于表達(dá)細(xì)胞外顆粒溶素蛋白的第二序列，所述第二序列為由SEQ ID No.2所示的基因序列。

2.如權(quán)利要求1所述的結(jié)核病基因藥物，其特征在于，所述腺病毒滴度在10¹⁰PFU/ml至10¹²PFU/ml之間。

3.如權(quán)利要求1或2所述結(jié)核病基因藥物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

步驟1、將表達(dá)細(xì)胞內(nèi)顆粒溶素蛋白的第一序列以及表達(dá)細(xì)胞外顆粒溶素蛋白的第二序列分別整合到穿梭質(zhì)粒上，形成細(xì)胞內(nèi)顆粒溶素蛋白基因穿梭質(zhì)粒以及細(xì)胞外顆粒溶素蛋白基因穿梭質(zhì)粒；

步驟2、將步驟1獲得的細(xì)胞內(nèi)顆粒溶素蛋白基因穿梭質(zhì)粒以及細(xì)胞外顆粒溶素蛋白基因穿梭質(zhì)粒分別與骨架質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，獲得表達(dá)細(xì)胞內(nèi)顆粒溶素蛋白的第一腺病毒和表達(dá)細(xì)胞外顆粒溶素蛋白的第二腺病毒；

步驟3、將第一腺病毒與第二腺病毒分別純化，并按照數(shù)量比例2∶8至8∶2混合，即制得本發(fā)明提供的基因藥物。

4.如權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，將腺病毒滴度稀釋到10¹⁰PFU/ml至10¹²PFU/ml之間。

5.一種結(jié)核病治療型疫苗，其特征在于，包括如權(quán)利要求1或2所述的結(jié)核病基因藥物。