[發明專利]一種基于Au?Fe3O4@Pd?ZIF?8標記的夾心型免疫傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201610301770.9
• 申請日: 2016-05-09
• 公開（公告）號: CN106018806B
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 李月云;王平;董云會;馮金慧;劉會;劉青;陳磊
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于納米功能材料、免疫分析以及生物傳感技術領域，提供了一種基于Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8標記的夾心型免疫傳感器的制備方法及應用。

背景技術

腫瘤的發病率高，生長和轉移速度快，對人類的健康有極大的危害。腫瘤標記物是腫瘤細胞產生和釋放的以抗原、酶、激素等形式的代謝產物存在于腫瘤細胞內或宿主體液中，其在臨床上對于隨原發腫瘤的發現，腫瘤高危人群的篩選、良性和惡性腫瘤的鑒別診斷、腫瘤發展程度的判斷，腫瘤的治療效果的觀察和評價及腫瘤復發和預后的預測產生極大的影響，引起人們的廣泛關注。

CA125、CEA等常見的腫瘤標志物，對于肝癌的診斷都能起到一定的作用。對于腫瘤標記物的檢測方法很多，但多數檢測方法繁瑣，操作復雜，費用昂貴，檢出限高，因此，建立一種快速、簡便、靈敏的檢測方法有重要意義。

夾心型電化學免疫傳感器結合了高特異性的免疫分析技術和高靈敏的電化學分析技術，具有靈敏度高、制備簡單、檢測快速、成本低、等優點，在臨床檢驗、環境監測、食品安全控制、生物監測等領域都有重要的應用價值。而構建電化學免疫傳感器的關鍵有兩點：其一是采用簡單、快速、有效的方法將抗原抗體等生物分子固定在電極表面；其二是開發傳感器的信號放大技術。

發明內容

本發明提供了一種基于Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8標記的夾心型免疫傳感器的制備方法及應用，實現了對肝癌腫瘤標志物CEA、CA125的高靈敏檢測。

本發明的目的之一是提供一種基于Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8標記的夾心型免疫傳感器的制備方法。

本發明的目的之二是將所制備的Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8標記的夾心型免疫傳感器，用于腫瘤標志物的靈敏檢測。

本發明的技術方案，包括以下步驟。

1. 一種基于Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8標記的夾心型免疫傳感器的制備方法，其特征在于，步驟如下：

（1）將6 μL、1 ~ 3 mg/mL的Au@GO-Th滴涂到用Al₂O₃拋光粉打磨成鏡面的直徑為4 mm的玻碳電極的表面，室溫下晾干，超純水沖洗電極表面，晾干；

（2）繼續將6 μL、8 ~ 12 μg/mL的腫瘤標志物捕獲抗體Ab₁溶液孵化到電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干；

（4）繼續將3 μL、質量分數為0.5 ~ 2.5%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到電極表面，以封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干；

（5）滴加6 μL、0.1pg/mL~ 50 ng/mL的一系列不同濃度的腫瘤標志物抗原Ag溶液到電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中干燥；

（6）繼續將6 μL、1 ~ 5 mg/mL的Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8-Ab₂捕獲抗體孵化物溶液滴加到電極表面，置于4℃冰箱中晾干，制得一種基于Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8標記的夾心型免疫傳感器。

2.所述的Au@GO-Th、Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8-Ab₂捕獲抗體孵化物溶液，制備步驟如下：

（1）Au@GO-Th的制備

1）Au納米粒子的制備

在99 mL超純水中加入1 mL、質量分數為1%的HAuCI₄，加熱至沸騰，然后加入2.5 ~ 3.5 mL、質量分數為1%的檸檬酸酸三鈉，加熱至溶液顏色變成深紅色，繼續加熱15 ~ 25 min，冷卻至室溫得到Au納米粒子溶液；

2）GO-Th納米復合物的制備

將0.8 ~ 1.2 mg的氧化石墨烯加入1mL超純水中，充分攪拌，加入1mL、1mmol硫堇，室溫下攪拌36 ~ 48 h, 離心分離，超純水洗滌三次，得到GO-Th納米復合物，35℃真空干燥12h，備用；

3）Au@GO-Th的制備