[發明專利]一種基于Au?Fe3O4@Pd?ZIF?8標記的夾心型免疫傳感器的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201610301770.9
• 申請日: 2016-05-09
• 公開（公告）號: CN106018806B
• 公開（公告）日: 2017-07-21
• 發明（設計）人: 李月云;王平;董云會;馮金慧;劉會;劉青;陳磊
• 申請（專利權）人: 山東理工大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/532
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8標記的夾心型免疫傳感器的制備方法，其特征在于，所述夾心型免疫傳感器包括Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8-Ab₂捕獲抗體孵化物和固定有腫瘤標志物抗體Ab₁的Au@GO-Th修飾的電極，其中固定有腫瘤標志物抗體Ab₁的Au@GO-Th修飾的電極的制備步驟如下：

（1）將6 μL、1 ~ 3 mg/mL的Au@GO-Th滴涂到用Al₂O₃拋光粉打磨成鏡面的直徑為4 mm的玻碳電極的表面，室溫下晾干，超純水沖洗電極表面，晾干；

（2）繼續將6 μL、8 ~ 12 μg/mL的腫瘤標志物捕獲抗體Ab₁溶液孵化到電極表面，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干；

（3）繼續將3 μL、質量分數為0.5 ~ 2.5%的牛血清白蛋白BSA溶液滴加到電極表面，以封閉電極表面上非特異性活性位點，超純水沖洗，4℃冰箱中晾干。

2.如權利要求1所述的一種基于Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8標記的夾心型免疫傳感器的制備方法，所述Au@GO-Th、Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8-Ab₂捕獲抗體孵化物溶液，制備步驟如下：

（1）Au@GO-Th的制備

1）Au納米粒子的制備

在99 mL超純水中加入1 mL、質量分數為1%的HAuCI₄，加熱至沸騰，然后加入2.5 ~ 3.5 mL、質量分數為1%的檸檬酸三鈉，加熱至溶液顏色變成深紅色，繼續加熱15 ~ 25 min，冷卻至室溫得到Au納米粒子溶液；

2）GO-Th納米復合物的制備

將0.8 ~ 1.2 mg的氧化石墨烯加入1mL超純水中，充分攪拌，加入1mL、1mmol/L的硫堇，室溫下攪拌36 ~ 48 h, 離心分離，超純水洗滌三次，得到GO-Th納米復合物，35℃真空干燥12h，備用；

3）Au@GO-Th的制備

將10 ~ 15 mg GO-Th溶解到上述制備的20mL的Au納米粒子溶液中，室溫下攪拌12 h，離心分離，超純水洗滌三次， 35℃真空干燥12 h，制得Au@GO-Th；

（2）Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8-Ab₂捕獲抗體孵化物溶液的制備

1）PdNPs的制備

將65 ~ 70 g聚乙烯吡咯烷酮，20 mL無水乙醇，50 mL超純水，30 mL、2 ~ 3 mmol/L的H₂PdCI₆在燒瓶中混合，室溫下反應3 h；利用旋轉蒸發除去乙醇和水，所得Pd納米粒子溶解于40 ~ 60 mL丙酮溶液中，離心分離，分別用氯仿和己烷洗滌三次除去剩余的聚乙烯吡咯烷酮，60℃真空干燥12 h得到PdNPs；以甲醇為溶劑，制成0.25 mg/mL的PdNPs甲醇溶液備用；

2）Pd-ZIF-8的制備

將10 mL、0.25 mg/mL的PdNPs甲醇溶液，130 ~ 170 mL、25 mmol/L的2-甲基咪唑甲醇溶液， 140 ~ 160 mL、25 mmol/L的Zn（NO₃）₂·6H₂O甲醇溶液混合，室溫反應24 h，離心分離，用甲醇洗滌三次，35°C真空干燥12 h，制得Pd-ZIF-8；

3）磁性Fe₃O₄@Pd-ZIF-8的制備及氨基化

稱取2.5 ~ 2.9 g的FeCl₃.6H₂O加到70mL乙二醇中，再加入7.0 g NaAc，25 mL三乙胺和2.5 g Pd-ZIF-8，室溫下磁力攪拌30 ~ 40 min，后轉移至不銹鋼高壓反應釜中，加熱到200°C保持8 ~ 10 h，冷卻至室溫，離心分離，超純水洗滌三次， 35°C真空干燥12 h，制得磁性的Fe₃O₄@Pd-ZIF-8；

稱取0.1 ~ 0.2 g的Fe₃O₄@Pd-ZIF-8溶解到含有1mL氨丙基三乙氧基硅烷的10mL乙醇溶液中，油浴加熱至65 ~ 75°C，磁力攪拌1.5 h，磁分離，超純水洗滌三次，制得氨基化Fe₃O₄@Pd-ZIF-8；

4）Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8.

取1 ~ 2 mL上述制備的Au納米粒子溶液與2 mL、2 mg/mL的氨基化Fe₃O₄@Pd-ZIF-8溶液混合，室溫下振蕩24 h，磁分離，超純水洗滌三次，制得Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8;

5) Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8-Ab₂捕獲抗體孵化物溶液的制備

將6 ~ 10 mg的Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8分散到1 mL超純水中，加入1 mL、 20 μg/mL的腫瘤標志物檢測抗體Ab₂溶液，4℃恒溫振蕩培養箱中振蕩孵化12 ~ 24 h，離心分離，所得固體分散于PBS溶液中，制成1 ~ 5 mg/mL的Au-Fe₃O₄@Pd-ZIF-8-Ab₂捕獲抗體孵化物溶液，儲存于4 ℃冰箱中備用。