[發明專利]一種抑制K-RAS基因表達的siRNA及其前體和應用

在審

• 申請號: 201610292198.4
• 申請日: 2016-05-05
• 公開（公告）號: CN107345230A
• 公開（公告）日: 2017-11-14
• 發明（設計）人: 張辰宇;陳熹;梁宏偉;U·烏爾-拉赫曼;曾科
• 申請（專利權）人: 江蘇命碼生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;A61K31/7088;A61P35/00
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司31266
• 代理人: 崔佳佳,馬莉華

1.一種前體序列，其特征在于，其5’至3’端具有式I所示的結構：

B1為所需要的第一核糖核酸序列，其中所述的第一核糖核酸序列包括K-RAS siRNA正義鏈序列；

B2為與B1基本互補或完全互補的序列，且B2與C不互補；

C為莖環結構序列；

A1和A2分別為無，或任選的由4-5個堿基組成的RNA序列；

其中，所述K-RAS siRNA正義鏈的核苷酸序列選自序列表中：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:106或SEQ ID NO:263所示序列；

其中，所示的前體序列能在宿主中加工形成K-RAS siRNA。

2.如權利要求1所述的前體序列，其特征在于，所述的基本互補指所述B2與B1有2-8個堿基不互補，較佳地，所述B2與B1有3-5個堿基不互補；更佳地，所述的B2較B1缺失1-2個堿基。

3.如權利要求2所述的前體序列，其特征在于，所述的A1為UGCUG；和/或所述的A2為CAGG或CAGGA。

4.一種多核苷酸，其特征在于，所述的多核苷酸能被宿主轉錄形成權利要求1中所述的前體序列。

5.一種表達載體，其特征在于，所述的表達載體含有權利要求1所述的前體序列或權利要求1所述的多核苷酸。

6.一種藥物制劑，其特征在于，所述的制劑含有：

(a)用于表達抑制K-RAS基因表達的siRNA的表達載體；以及

(b)藥學上可接受的載體；

優選的，所述表達載體表達權利要求1所述的前體序列。

7.一種施用藥物的方法，其特征在于，包括步驟：

將權利要求6所述的藥物制劑施用于哺乳動物的第一部位，從而使得所述表達載體在所述哺乳動物體內被加工形成微粒子(microvesicle)，并被運輸到所述哺乳動物的第二部位，并在所述的第二部位表達所述的siRNA。

8.一種藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物含有權利要求1所述的前體序列、或權利要求5所述的表達載體，和藥學上可接受的載體。

9.如權利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物為權利要求5所述的表達載體，較佳地，為含有權利要求1所述前體序列的質粒；和/或

所述藥物組合物的劑型包括片劑、膠囊劑、粉劑、丸劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液、混懸液、乳劑、混懸劑、注射液、或粉針劑；較佳地，所述的劑型為注射劑，如靜脈注射劑、腹腔注射劑。

10.如權利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物的施用方法包括：口服、呼吸道、注射、透皮、粘膜或腔道給藥；較佳地，所述施用方法包括直接注射質粒。

11.一種抑制K-RAS基因表達的siRNA，其特征在于，所述siRNA的正義鏈核苷酸序列選自序列表或表5中：SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:73、SEQ ID NO:88、SEQ ID NO:98、SEQ ID NO:101和SEQ ID NO:106或SEQ ID NO:263所示序列；優選為如序列表中SEQ ID NO:263所示的序列。

12.如權利要求1所述的前體序列、權利要求5所述的表達載體，或如權利要求11所述的siRNA的用途，其特征在于，(i)用于制備K-RAS的抑制劑；和/或(ii)用于制備抗K-RAS高表達惡性腫瘤的藥物組合物；

較佳地，所述的惡性腫瘤包括腎癌、口腔上皮癌、頭頸癌、膀胱癌、腦瘤、膠質細胞瘤、肝癌、肺癌、胃癌、食管癌、卵巢癌、結直腸癌、宮頸癌、胰腺癌、前列腺癌、白血病、或乳腺癌。