[發明專利]Bol024541基因在鑒定植物菌核病抗性中的用途

有效

• 申請號: 201610290091.6
• 申請日: 2016-05-05
• 公開（公告）號: CN105734162B
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發明（設計）人: 梅家琴;錢偉;李月華
• 申請（專利權）人: 西南大學
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895
• 代理公司: 成都行之專利代理事務所(普通合伙) 51220
• 代理人: 吳興偉

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及Bol024541基因在鑒定植物菌核病抗性中的用途。本發明要解決的技術問題是為利用分子生物學方法鑒定植物菌核病抗性提供一種新選擇。本發明的技術方案是Bol024541基因在鑒定植物菌核病抗性中的用途。本發明還提供了一種篩選植物報告基因用于qRT?PCR鑒定植物菌核病抗性的方法，包括如下步驟：a、植物報告基因的篩選；b、植物報告基因穩定性鑒定；c、報告基因對植物核盤菌抗性指示效率的檢測；d、抗性預測函數的構建。本發明首次建立篩選植物報告基因的方法，以用于qRT?PCR鑒定植物的菌核病抗性。

技術領域

本發明屬于分子生物學技術領域，具體涉及Bol024541基因在鑒定植物菌核病抗性中的用途。

背景技術

抗(耐)病原菌種質資源的篩選和評價是培育抗病新品種的首要任務，而快速準確的抗病性鑒定方法是篩選抗源、評價育種材料和品種抗病性乃至抗病育種的關鍵環節。目前對植物病原菌抗性鑒定常用的方法通常是活體或離體接病原菌后，根據發病率及發病嚴重程度等表型數據來反應寄主抗性。菌核病是由核盤真菌Sclerotinia sclerotiorum(Lib.)de Bary引起的一種非專一性植物病害，可侵染茄科(Solanaceae)、十字花科(Cruciferae)等75個科、278個屬、400多種植物，造成嚴重的產量損失。對于十字花科植物菌核病，通常是在葉片、莖稈等部位接種帶菌瓊脂塊，在接種后一定時間進行病斑面積或病斑長度測量，以反應植株抗菌核病水平。但上述方法存在統計周期長的缺點，比如葉片接種一般是接種后3-4天進行菌斑面積統計，莖稈接種一般在接種后為1-3周統計。此外，上述方法在菌斑統計時容易產生測量誤差，精確度不理想。分子生物學方法已成功應用精準于檢測病原菌在植物中的含量，比如采用核盤菌保守序列特異引物，利用PCR或者RT-PCR檢測油菜花瓣和田間的核盤菌孢子濃度等。這些方法利用病原菌基因作為報告基因來檢測病原菌的存在及含量，鑒定結果是對病害流行程度或田間發病程度進行預測，無法體現寄主的抗病水平。目前，植物抗菌核病水平的分子生物學鑒定尚處于空白。

發明內容

本發明要解決的技術問題是為利用分子生物學方法鑒定植物菌核病抗性提供一種新選擇。

本發明的技術方案是Bol024541基因在鑒定植物菌核病抗性中的用途。

具體的，所述的植物為十字花科蕓薹屬植物。

具體的，所述的蕓薹屬植物為甘藍、白菜或甘藍型油菜。

具體的，所述Bol024541基因具有如SEQ ID No.1所述的核苷酸序列。

具體的，所述感病度數據y與報告基因Bol024541的表達量數據x構建回歸模型為：y＝39.941x+7.0605，r＝0.921,P0.01。

本發明還提供了一種篩選植物報告基因用于qRT-PCR鑒定植物菌核病抗性的方法，包括如下步驟：

a、植物報告基因的篩選：對一份植物材料進行人工接種核盤菌，以接種點為中心設置至少3個空間梯度，同時設至少3個時間梯度進行植物組織樣本采集、RNA提取、及反轉錄cDNA；對上述cDNA樣本中的基因進行表達量檢測；離接種部位由遠到近的多個樣本間、接種時間由短到長的多個樣本間比較，表達量均持續上調的基因作為初級候選報告基因；

b、植物報告基因穩定性鑒定：對一份植物材料進行人工接種核盤菌，在接種后至少3個時間梯度，不同的時間點在離接種點距離相同處取相同面積的植物組織制備cDNA；每個cDNA樣本分成3等分，分別添加0ng、1000～1500ng、2000～3000ng的核盤菌cDNA，并以此為模板檢測步驟a所獲得初級候選報告基因的表達量；對每個時間點含不同量核盤菌cDNA樣本中的候選報告基因表達量進行多重比較，在各個時間點含不同量核盤菌cDNA樣本中差異均不顯著P0.05的基因視為候選報告基因；