[發(fā)明專利]Bol024541基因在鑒定植物菌核病抗性中的用途

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610290091.6
• 申請日: 2016-05-05
• 公開（公告）號(hào): CN105734162B
• 公開（公告）日: 2020-10-02
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梅家琴;錢偉;李月華
• 申請（專利權(quán)）人: 西南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/6895
• 分類號(hào): C12Q1/6895
• 代理公司: 成都行之專利代理事務(wù)所(普通合伙) 51220
• 代理人: 吳興偉

1.Bol024541 基因在鑒定植物菌核病抗性中的用途，所述的植物為十字花科蕓薹屬植物，所述 Bol024541 基因?yàn)槿?SEQ ID NO.1 所示的核苷酸序列。

2.如權(quán)利要求 1 所述的用途，其特征在于：所述的蕓薹屬植物為甘藍(lán)、白菜或甘藍(lán)型油菜。

3.如權(quán)利要求 1 所述的用途，其特征在于：感病度數(shù)據(jù) y 與報(bào)告基因 Bol024541 的表達(dá)量數(shù)據(jù) x 構(gòu)建回歸模型為：y＝39.941x+7.0605，r＝0.921,P＜0.01。

4.一種篩選植物報(bào)告基因用于 qRT-PCR 鑒定植物菌核病抗性的方法，其特征在于：包括如下步驟：

a、植物報(bào)告基因的篩選：對一份植物材料進(jìn)行人工接種核盤菌，以接種點(diǎn)為中心設(shè)置至少3 個(gè)空間梯度，同時(shí)設(shè)至少 3 個(gè)時(shí)間梯度進(jìn)行植物組織樣本采集、RNA 提取、及反轉(zhuǎn)錄 cDNA；對上述 cDNA 樣本中的基因進(jìn)行表達(dá)量檢測；離接種部位由遠(yuǎn)到近的多個(gè)樣本間、 接種時(shí)間由短到長的多個(gè)樣本間比較，選擇在抗病和感病材料中表達(dá)量均隨著時(shí)間點(diǎn)延長持續(xù)上調(diào)或下調(diào)的基因作為初級(jí)候選報(bào)告基因；

b、植物報(bào)告基因穩(wěn)定性鑒定：對一份植物材料進(jìn)行人工接種核盤菌，在接種后至少 3個(gè) 時(shí)間梯度，不同的時(shí)間點(diǎn)在離接種點(diǎn)距離相同處取相同面積的植物組織制備 cDNA；每個(gè) cDNA 樣本分成 3 等分，分別添加 0ng、1000～1500ng、2000～3000ng 的核盤菌 cDNA，并 以此為模板檢測步驟 a 所獲得初級(jí)候選報(bào)告基因的表達(dá)量；對每個(gè)時(shí)間點(diǎn)含不同量核盤菌 cDNA 樣本中的候選報(bào)告基因表達(dá)量進(jìn)行多重比較，在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)含不同量核盤菌cDNA 樣 本中差異均不顯著 P0.05 的基因視為候選報(bào)告基因；

c、報(bào)告基因?qū)χ参锖吮P菌抗性指示效率的檢測：對多份植物材料進(jìn)行人工接種核盤菌，在接種后第一個(gè)時(shí)間點(diǎn)取相同面積的植物組織準(zhǔn)備 cDNA，然后檢測 b 所選擇的候選報(bào)告基 因表達(dá)量，對候選報(bào)告基因表達(dá)量與感病度表型數(shù)據(jù)進(jìn)行相關(guān)性分析，相關(guān)系數(shù)值達(dá)到顯著 即 P＜ 0.05 的基因即為報(bào)告基因；

d、抗性預(yù)測函數(shù)的構(gòu)建：利用步驟 c 中材料的感病度表型數(shù)據(jù)為 y 值，以報(bào)告基因表達(dá) 量數(shù)據(jù)為 x 值，構(gòu)建 x 與 y 的回歸函數(shù)，相關(guān)系數(shù) R 值最大、顯著度水平 P＜0.05、函數(shù)中 x 系數(shù)不含負(fù)數(shù)的函數(shù)當(dāng)選為最優(yōu)預(yù)測函數(shù)。

5.如權(quán)利要求 4 所述的方法，其特征在于：步驟 a、b 和 c 中所述的人工接種核盤菌是指 定點(diǎn)接種核盤菌菌源。

6.如權(quán)利要求 4 或 5 所述的方法，其特征在于：步驟 a 中所述的空間梯度是指，以接種 點(diǎn)為中心，離中心不同距離為半徑畫圈，相鄰 2 個(gè)圈之間的間距相等，為 1～1.5cm。

7.如權(quán)利要求 4 所述的方法，其特征在于：步驟 a 和 b 中所述的時(shí)間梯度是指接種后不同時(shí)間點(diǎn)取樣，每兩次取樣的時(shí)間間隔相同，為 12 小時(shí)；步驟 c 所述的第一個(gè)時(shí)間點(diǎn)為步驟 a 和 b 中所述的時(shí)間梯度中的第一個(gè)時(shí)間點(diǎn)；步驟 b 和 c 中所述取相同面積的植物組織是指， 根據(jù)設(shè)計(jì)的取樣時(shí)間點(diǎn)，以最長時(shí)間點(diǎn)樣本的病斑大小為依據(jù)，取能夠完全覆蓋該病斑大小 的圓形組織。

8.如權(quán)利要求 4 所述的方法，其特征在于：所述植物材料為甘藍(lán)，步驟 c 中的報(bào)告基因?yàn)?Bol024541 基因，所述 Bol024541 基因?yàn)槿?SEQ ID NO.1 所示的核苷酸序列。