[發明專利]一種生態修復用保定苜蓿的組織培養方法

有效

• 申請號: 201610286951.9
• 申請日: 2016-05-03
• 公開（公告）號: CN105918123B
• 公開（公告）日: 2017-11-03
• 發明（設計）人: 袁建波;晁躍輝;韓烈保;謝琦
• 申請（專利權）人: 北京林業大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司11002
• 代理人: 王文君

技術領域

本發明屬于植物組織培養領域，具體涉及一種生態修復用保定苜蓿(Medicago sativa L.cv.Baoding)的組織培養的方法。

背景技術

紫花苜蓿是一種重要的牧草，由于其具有營養價值高、產量高、能產生許多優良植物蛋白等優點，深受牛羊的喜愛，被譽為“牧草之王”。在美國，紫花苜蓿已經成為了第四大種植作物，是主要的畜牧飼料來源。保定苜蓿是紫花苜蓿中一個重要的品種，在國內，常被作為一個優選種植品種。

目前關于保定苜蓿的離體組織培養尚未見報道，研究主要集中紫花苜蓿其他品種，在其他品種的研究已經有用胚軸，葉片，子葉等外植體來誘導愈傷，利用離體組織來誘導愈傷進而使植株再生是一種普遍方法，但也存在愈傷生長慢，芽分化率低，不同外植體的再生率因品種差異而不同，不同的品種的組培特性也不一樣，例如危曉薇等(危曉薇蔡麗娟李仁敬，紫花苜蓿組織培養及其再生植株，新疆農業科學，1991,10(3):73-74)利用新疆和田大葉紫花苜蓿無菌子葉和下胚軸為外植體進行離體培養，以SH為基本培養基分別添加0.5mg-3mg/LNAA和0.1mg/LKT的植物生長調節劑，外植體愈傷的誘導和芽的分化都使用這種培養基。研究結果發現，子葉的愈傷誘導率為52.3％，分化率為25％；下胚軸愈傷誘導率為100％，分化率為25.9％。

此外，徐博等(徐博，任偉，王英哲等，紫花苜蓿子葉的高頻離體再生體系的建立與優化，湖北農業科學，2015,20(10)：5160-5161)以東北地區不同的紫花苜蓿(公農1號、公農2號、公農5號、龍牧801和龍牧803)的子葉為外植體進行離體培養，并進行培養基配方優化，研究發現MS+2mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT為愈傷最佳誘導培養基，UM+1.2mg/L KT為最佳分化培養基，不同基因型的愈傷誘導率存在顯著差異，其中公農5號表現最佳。

此外，侯永霞等(侯永霞，王俊杰等，野生黃花苜蓿組織培養及再生體系研究，草地學報，2012,3(5)：523-528)以呼倫貝爾草原野生黃花苜蓿無菌苗的子葉和下胚軸為外植體進行離體培養，研究發現，MS+1.5mg/L 2,4-D+0.4mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂為愈傷誘導培養基，子葉和下胚軸愈傷誘導率均可達到100％；MS+0.5mg/L KT+0.5mg/L NAA+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂為胚性愈傷形成培養基，胚性愈傷形成率為81.5％；MS+0.25mg/L KT+0.05mg/L NAA+20g/L蔗糖+7g/L瓊脂為分化培養基，芽的分化率為36.5％；

此外，王慶東等(王慶東，劉青青等，紫花苜蓿NFF2高效組織培養再生體系的建立,鄭州牧業工程高等專科學校學報，2013,4(11)：23-25)以NFF2無菌苗葉柄為外植體進行離體培養，研究發現，以SH+1.0mg/L 2,4-D+0.2mg/L為愈傷誘導培養基，愈傷誘導率為91％；以MSO為基礎培養基，添加一定的濃度的KT，結果發現MSO培養基為最佳的分化培養基，分化率為77％。

此外，耿小麗等(耿小麗，魏臻武等，苜蓿花藥培養及倍性鑒定，草原與草坪，2008,5(5)：1-5)以紫花苜蓿品種阿爾崗金與Salado雜交的F1代的花藥為外植進行離體培養，研究發現，NB+0.5mg/L2,4-D+0.3mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+3.0mg/L KT為最佳愈傷誘導培養基，愈傷誘導率為45.8％；MS+0.2mg/L NAA+3.0mg/L 6-BA為最佳的分化培養基，芽的分化率為62％。

此外，王新等(王新，賈永鋒，紫花苜蓿對土壤重金屬富集及污染修復的潛力，土壤通報，2009,4(8)：933-935)開展了在重金屬復合污染條件下苜蓿田間小區試驗研究，分析了重金屬復合污染對紫花苜蓿生長的影響及植株體中重金屬吸收特征及紫花苜蓿對重金屬污染土壤修復的能力，結果發現，當土壤重金屬濃度含量低劑量時，紫花苜蓿的生長不受重金屬的脅迫影響，反而苜蓿的濕重比對照增加了14.18％，株高增加了6.25％，高劑量處理時，苜蓿濕重比對照減少5.97％，株高降低了8.75％，苜蓿對重金屬吸收系數大小依次為Cd>Zn>Cu>Pb。

綜上所述，在紫花苜蓿其他品種離體組織培養研究已經比較成熟，但存在技術難題：