[發(fā)明專利]一種生態(tài)修復(fù)用保定苜蓿的組織培養(yǎng)方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610286951.9 | 申請(qǐng)日： | 2016-05-03 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN105918123B | 公開（公告）日： | 2017-11-03 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 袁建波;晁躍輝;韓烈保;謝琦 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 北京林業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | A01H4/00 | 分類號(hào)： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100083 *** | 國(guó)省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 生態(tài) 修復(fù) 保定 苜蓿 組織培養(yǎng) 方法 | ||
1.一種生態(tài)修復(fù)用保定苜蓿的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)外植體的選擇：選擇發(fā)芽4～6天的苜蓿幼苗的子葉作為外植體；
2)愈傷組織的誘導(dǎo)：將所述外植體接種到愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至形成愈傷組織；
所述愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基為添加了3mg/L 2,4-D、0.2mg/L 6-BA、25～35g/L蔗糖和2～6g/L植物凝膠的MS培養(yǎng)基；
3)愈傷組織的分化：
將所述愈傷組織接種到前期分化培養(yǎng)基中，至出現(xiàn)體胚；再將所述體胚接種到后期分化培養(yǎng)基中，至分化出芽；
所述前期分化培養(yǎng)基為添加了0.4mg/L 6-BA、25～35g/L蔗糖和2～6g/L植物凝膠的MS培養(yǎng)基；
所述后期分化培養(yǎng)基為添加了14～16g/L蔗糖和2～6g/L植物凝膠的1/2MS培養(yǎng)基；
4)生根培養(yǎng)：將所述芽接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，得苜蓿幼苗；
生根培養(yǎng)基為添加了1.0mg/L NAA、10～20g/L蔗糖和5～9g/L瓊脂的1/2MS培養(yǎng)基；
所述愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基、前期分化培養(yǎng)基、后期分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基的pH均為5.8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈傷的組織誘導(dǎo)過程中的培養(yǎng)條件為溫度24～26℃，光照30～50μE/m2/s，16h光照培養(yǎng)，8h黑暗培養(yǎng)。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈傷組織的分化過程中的培養(yǎng)條件為溫度24～26℃，光照40～50μE/m2/s，光照周期為16h光照培養(yǎng)，8h黑暗培養(yǎng)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述生根培養(yǎng)的過程中的培養(yǎng)條件為溫度24～26℃，光照40～50μE/m2/s，16h光照培養(yǎng)，8h黑暗培養(yǎng)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈傷的誘導(dǎo)過程中，每2周繼代一次。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在后期分化培養(yǎng)過程中，至所述芽生長(zhǎng)至8～10cm再接入生根培養(yǎng)基。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步驟：
1)外植體的選擇：選擇發(fā)芽5天的苜蓿幼苗的子葉作為外植體；
2)愈傷組織的誘導(dǎo)：將所述外植體接種到愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至形成愈傷組織；
所述愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基為添加了3mg/L 2,4-D、0.2mg/L 6-BA、30g/L蔗糖和4g/L植物凝膠的MS培養(yǎng)基；
3)愈傷組織的分化：
將所述愈傷組織接種到前期分化培養(yǎng)基中，至出現(xiàn)體胚；再將所述體胚接種到后期分化培養(yǎng)基中，至分化出芽；
所述前期分化培養(yǎng)基為添加了0.4mg/L 6-BA、30g/L蔗糖和4g/L植物凝膠的MS培養(yǎng)基；
所述后期分化培養(yǎng)基為添加了15g/L蔗糖和4g/L植物凝膠的1/2MS培養(yǎng)基；
4)生根培養(yǎng)：將所述芽接種到生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，得苜蓿幼苗；
生根培養(yǎng)基為添加了1.0mg/L NAA、15g/L蔗糖和7g/L瓊脂的1/2MS培養(yǎng)基；
所述愈傷誘導(dǎo)培養(yǎng)基、前期分化培養(yǎng)基、后期分化培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基的pH均為5.8。
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