[發明專利]尿液中代謝物的檢測方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201610286816.4
• 申請日: 2016-04-29
• 公開（公告）號: CN107340337B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 張必良;胡俊杰;呂小俠;葉奕棟
• 申請（專利權）人: 廣州市銳博生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

本發明涉及一種尿液中代謝物的檢測方法，包括以下步驟：(1)去除尿液樣本雜質：除尿素、除硫和磷、沉淀蛋白，得尿液C；(2)干燥：干燥尿液C，得尿液殘留物D；(3)肟化：將尿液殘留物D用肟化試劑對酸類或醇類代謝物中的β?羰基進行肟化，得尿液E；(4)衍生化：將尿液E用衍生化試劑進行衍生化，得供試尿液樣品F；所述衍生化試劑為硅烷化試劑、催化劑和催化劑穩定劑組成的混合試劑；所述催化劑穩定劑選自二硫赤蘚糖醇、二硫蘇糖醇、1?丙硫醇、乙硫醇、2?巰基乙醇；(5)檢測：用氣相色譜?質譜聯用的方法對供試尿液樣品F進行檢測。該方法具有樣本用量少、前處理簡單、耗時短、檢測化合物種類多、結果分析快速準確等優點。

技術領域

本發明涉及生化檢測技術領域，特別是涉及一種尿液中代謝物的氣質聯用檢測方法和試劑盒。

背景技術

尿液中含有大量的與人體生命活動相關的代謝化合物，通過檢測這些代謝化合物的含量可反應出人體的代謝情況及疾病信息，為疾病的研究、診斷，尤其是代謝性疾病的診斷、治療及干預提供了有利幫助。但在尿液代謝物檢測領域，現有技術存在以下不足：

首先，現有方法以檢測有機酸居多(參見中國專利，CN 102621262 A，2012.08.01)，其方法檢測代謝物的種類較單一，不能滿足一次分析篩查多類代謝物的要求。

其次，尿液樣本前處理過程耗時較長(參見中國專利，CN 102621249 B，2014.01.08)，雖一次分析可檢測多類代謝化合物，但其前處理周期長，難以滿足批量或高通量檢測的需求。

再次，目前的定性和定量方式，大多需要加入標準品，其操作繁瑣，且有些標準品難以獲取或存在污染隱患。

綜上，一種快速、準確、高通量的尿液代謝物檢測方法亟待開發。

發明內容

基于此，本發明針對現有的尿液代謝物檢測方法存在的檢測代謝物種類單一、耗時長、需要標準品等不足，提供了一種準確、方便、高效、高通量的尿液中代謝物的檢測方法。

具體技術方案如下：

一種尿液中代謝物的檢測方法，包括以下步驟：

(1)去除樣本雜質：

(1.1)除尿素：取尿液樣本，加入尿素酶水溶液，孵育，去除尿液樣本中的尿素，得尿液A；

(1.2)除硫和磷：在尿液A中加入活性吸附劑，超聲，去除尿液A中的硫和磷，得尿液B；

(1.3)沉淀蛋白：在尿液B中加入蛋白沉淀試劑，混勻后離心，使尿液B中的蛋白沉淀，取上清液，得尿液C；

(2)干燥：干燥尿液C，得尿液殘留物D；

(3)肟化：在尿液殘留物D中加入肟化試劑對酸類或醇類代謝物中的β-羰基進行肟化，得尿液E；

(4)衍生化：在尿液E中加入衍生化試劑進行衍生化反應，得供試尿液樣品F；所述衍生化試劑為硅烷化試劑、催化劑和催化劑穩定劑組成的混合試劑；所述催化劑穩定劑選自二硫赤蘚糖醇、二硫蘇糖醇、1-丙硫醇、乙硫醇、2-巰基乙醇；

(5)檢測：取供試尿液樣品F用氣相色譜-質譜聯用的方法進行檢測。

在其中一些實施例中，所述氣相色譜-質譜聯用的方法進行檢測的條件為：進樣量0.9-1.1μL，分流模式進樣；進樣口溫度為245-255℃；載氣為氦氣，流速為1.1-1.3mL/min；柱箱初始溫度為55-65℃，17℃/min升至315-325℃，運行溫度為315-325℃，保持7-9min；傳輸管溫度為295-305℃；離子源模式為EI源；質譜檢測模式為全掃描模式。