[發明專利]尿液中代謝物的檢測方法和試劑盒

有效

• 申請號: 201610286816.4
• 申請日: 2016-04-29
• 公開（公告）號: CN107340337B
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發明（設計）人: 張必良;胡俊杰;呂小俠;葉奕棟
• 申請（專利權）人: 廣州市銳博生物科技有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N30/06
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 萬志香

1.一種尿液中代謝物的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)去除樣本雜質：

(1.1)除尿素：取尿液樣本，加入尿素酶水溶液，孵育，去除尿液樣本中的尿素，得尿液A；

(1.2)除硫和磷：在尿液A中加入活性吸附劑，超聲，去除尿液A中的硫和磷，得尿液B；所述活性吸附劑為活性氧化鋁；

(1.3)沉淀蛋白：在尿液B中加入蛋白沉淀試劑，混勻后離心，使尿液B中的蛋白沉淀，取上清液，得尿液C；

(2)干燥：干燥尿液C，得尿液殘留物D；

(3)肟化：在尿液殘留物D中加入肟化試劑對酸類或醇類代謝物中的β-羰基進行肟化，得尿液E；所述肟化在微波條件下進行，所述微波的功率為500-900W，反應時間為1-15min；

(4)衍生化：在尿液E中加入衍生化試劑進行衍生化反應，得供試尿液樣品F；所述衍生化試劑為硅烷化試劑、催化劑和催化劑穩定劑組成的混合試劑；所述催化劑穩定劑選自二硫赤蘚糖醇、二硫蘇糖醇、1-丙硫醇、乙硫醇、2-巰基乙醇；所述衍生化在微波條件下進行，所述微波的功率為500-900W，反應時間為1-15min；

(5)檢測：取供試尿液樣品F用氣相色譜-質譜聯用的方法進行檢測。

2.根據權利要求1所述的尿液中代謝物的檢測方法，其特征在于，步驟(4)所述硅烷化試劑選自N-甲基-N-(三甲基硅烷)-三氟乙酰胺、雙(三甲基硅烷)三氟乙酰胺、N-(叔丁基二甲基硅烷)-N-甲基三氟乙酰胺、叔丁基二甲基氯硅烷或N,N-二乙氨基三甲基硅烷；所述催化劑選自三甲基氯硅烷、三甲基碘硅烷或三甲基硅烷咪唑；所述硅烷化試劑、催化劑和催化劑穩定劑的配比為100μL:1μL:0.2-0.5mg；所述衍生化試劑與尿液樣本的體積比為0.25-1:1。

3.根據權利要求1或2所述的尿液中代謝物的檢測方法，其特征在于，步驟(1.2)所述活性吸附劑與尿液樣本的配比為0.5-25mg：1mL。

4.根據權利要求1或2所述的尿液中代謝物的檢測方法，其特征在于，步驟(1.3)中所述蛋白沉淀試劑選自甲醇、乙醇、丙醇、丁醇、異丙醇、異丁醇、丙酮酸、丙酮、乙腈、吡啶中的一種或幾種；所述蛋白沉淀試劑與尿液樣本的體積比為2-15:1。

5.根據權利要求1或2所述的尿液中代謝物的檢測方法，其特征在于，步驟(2)所述干燥為分步干燥，所述干燥方式選自干燥劑干燥，氮吹儀吹干或冷凍干燥中的兩種。

6.根據權利要求1或2所述的尿液中代謝物的檢測方法，其特征在于，步驟(3)所述肟化試劑選自甲氧胺鹽酸鹽或乙氧胺鹽酸鹽的吡啶、乙腈或三乙胺溶液，其中甲氧胺鹽酸鹽或乙氧胺鹽酸鹽的的含量為1-10wt％；所述肟化試劑與尿液樣本的體積比為0.1-1:1。

7.根據權利要求1或2所述的尿液中代謝物的檢測方法，其特征在于，所述肟化和/或衍生化在微波條件下進行，所述微波的功率為700W，肟化或衍生化的反應時間為1-15min。

8.根據權利要求1或2所述的尿液中代謝物的檢測方法，其特征在于，所述代謝物包括堿基、核苷、有機酸、酮類、醛類以及糖類代謝物。

9.一種用于檢測尿液中代謝物的試劑盒，其特征在于，包括衍生化試劑和除硫和磷的活性吸附劑，所述衍生化試劑為硅烷化試劑、催化劑、催化劑穩定劑的混合試劑，所述催化劑穩定劑選自二硫赤蘚糖醇、二硫蘇糖醇、1-丙硫醇、乙硫醇、2-巰基乙醇，所述活性吸附劑為活性氧化鋁。