[發(fā)明專利]一種采用鈣黃綠素標記斑馬魚胃腸道的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610286065.6 | 申請日： | 2016-05-03 |
| 公開（公告）號： | CN105709242B | 公開（公告）日： | 2018-10-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 孫晨;韓建;韓利文;王雪;王榮春;侯海榮;陳錫強 | 申請（專利權(quán)）人： | 山東省科學(xué)院生物研究所 |
| 主分類號： | A61K49/00 | 分類號： | A61K49/00 |
| 代理公司： | 濟南金迪知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 37219 | 代理人： | 朱家富 |
| 地址： | 250014 山*** | 國省代碼： | 山東;37 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 采用 黃綠 標記 斑馬 胃腸道 方法 | ||
1.一種采用鈣黃綠素標記斑馬魚胃腸道的方法，其特征在于，步驟如下：
（1）挑選受精144hpf發(fā)育正常的斑馬魚胚胎，放入含有培養(yǎng)液的培養(yǎng)容器中，加入鈣黃綠素溶液，調(diào)鈣黃綠素的質(zhì)量濃度為0.15%～0.25%；
（2）在23℃～27℃的恒溫條件下避光孵育斑馬魚胚胎9～11min，然后用培養(yǎng)液清洗，制得標記后的斑馬魚胚胎；
（3）將步驟（2）制得的標記后的斑馬魚胚胎麻醉，利用圖像采集工具，對斑馬魚胚胎中顯示黃綠熒光的胃腸道部分進行影像采集并保存。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，所述斑馬魚胚胎為健康野生型AB系斑馬魚胚胎。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，培養(yǎng)容器為標準規(guī)格的細胞培養(yǎng)板。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述培養(yǎng)容器為標準規(guī)格的6孔或12孔細胞培養(yǎng)板。
5.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）中，所用鈣黃綠素溶液的質(zhì)量濃度為0.2%。
6.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（1）和（2）中，所述培養(yǎng)液為胚胎培養(yǎng)水，包括如下組分：
NaCl 5mM，KCl 0.17mM，CaCl2 0.4mM，MgSO4 0.16mM，去離子水配制。
7.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，避光孵育的恒溫條件為25℃。
8.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，避光孵育斑馬魚胚胎的時間為10min。
9.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（2）中，培養(yǎng)液清洗次數(shù)為2～3次。
10.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中，麻醉采用的麻醉劑為三卡因。
11.如權(quán)利要求10所述的方法，其特征在于，所述麻醉劑的使用質(zhì)量濃度為0.02%。
12.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟（3）中，影像采集工具為熒光顯微鏡或激光共聚焦顯微鏡。
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