[發(fā)明專利]一種基于疏水柱的烏司他丁純化方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610280471.1
• 申請(qǐng)日: 2016-04-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105753975A
• 公開(kāi)（公告）日: 2016-07-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王旭;鄭少亮;許文勤;肖益熱
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣東天普生化醫(yī)藥股份有限公司
• 主分類號(hào): C07K14/81
• 分類號(hào): C07K14/81;C07K1/20
• 代理公司: 北京精金石專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11470
• 代理人: 劉曄

1.一種基于疏水柱的烏司他丁純化方法，其特征在于，該方法包括：將烏司他丁粗品經(jīng)過(guò)前處理，通過(guò)疏水柱層析進(jìn)行純化，洗脫液超濾，即得烏司他丁。

2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的疏水柱層析包括以下步驟：

1)前處理：將烏司他丁粗品溶解在水中，以質(zhì)量g/體積ml計(jì)，烏司他丁∶水為1∶2，再用硅藻土過(guò)濾，收集濾液，加入ZnCl₂使其終濃度為150mmol/L，用預(yù)冷的95％乙醇沉淀，用量以體積ml/ml比計(jì)，樣品溶解液體積∶95％乙醇體積為1∶1.1，攪拌30min，板框過(guò)濾，取上清液，調(diào)電導(dǎo)50～55ms/cm，冰醋酸調(diào)pH4.0；樣品溶解液體積∶95％乙醇體積為1∶2.3，攪拌30min，板框過(guò)濾，取沉淀物；沉淀物溶解于3倍體積的水；

2)上樣及洗滌：用pH3.5～4.5，1.5～2.0mol/L(NH₄)₂SO₄－0.05～0.15mol/L醋酸緩沖液平衡層析柱，上樣，上樣溶液的蛋白濃度為25～30mg/mL膠，用pH3.5～4.5，1.5～2.0mol/L(NH₄)₂SO₄－0.05～0.15mol/L醋酸緩沖液洗滌；

3)洗脫：用pH4.0～6.0、0.08mol/L磷酸鹽緩沖液－0.4mol/L氯化鈉溶液進(jìn)行洗脫，洗脫液用超濾膜超濾，得純化的烏司他丁原料藥。

3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述的疏水柱層析的層析介質(zhì)選自：PhenylBio-sepFF、PhenylBio-sepHP和ButylBio-sepHP中的一種。

4.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的洗滌液為pH值4.0的1.5mol/L(NH₄)₂SO₄－0.1mol/L醋酸緩沖液。

5.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的洗脫液pH值為5.5。

6.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述的超濾膜包括分子量5000～3萬(wàn)的超濾膜。