[發(fā)明專(zhuān)利]一種檢測(cè)鮮煙葉中多種類(lèi)黃酮代謝組學(xué)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201610267800.9
• 申請(qǐng)日: 2016-04-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN105699579B
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 金立鋒;趙明月;胡賁;周會(huì)娜;許國(guó)旺;劉萍萍;鄭慶霞;陳千思;陳霞;翟妞;王燃;李鋒;武明珠;林福呈
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)煙草總公司鄭州煙草研究院
• 主分類(lèi)號(hào): G01N30/88
• 分類(lèi)號(hào): G01N30/88;G01N30/06;G01N30/02
• 代理公司: 鄭州中民專(zhuān)利代理有限公司41110
• 代理人: 姜振東

1.一種檢測(cè)鮮煙葉中多種類(lèi)黃酮代謝組學(xué)方法，其特征在于：采用超聲萃取法提取煙葉中的類(lèi)黃酮成分，通過(guò)UPLC-QqQ-MS/MS實(shí)現(xiàn)新鮮煙葉中蘆丁、槲皮素、柚皮素、山奈酚苷、紫云英苷、柚皮苷、異甘草素的檢測(cè)，具體步驟如下：

（1）將新鮮煙葉凍干粉末，用濃度60%-90%甲醇混勻，20℃-30℃超聲水浴10min-30min；離心棄沉淀，經(jīng)0.22μm有機(jī)膜過(guò)濾后儲(chǔ)存?zhèn)溆茫鳛榇郎y(cè)樣品；

（2）配制上述七種物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，標(biāo)準(zhǔn)工作溶液為七種物質(zhì)的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，其中蘆丁的質(zhì)量濃度為0.01, 0.1, 1, 20, 40, 60, 80, 100, 200, 400 mg/L ，其他標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為0.01, 0.1, 1, 20, 40, 60, 80, 100 mg/L；其中200mg/l、400 mg/l濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液只含蘆丁和內(nèi)標(biāo)；

（3） 采用UPLC-QqQ-MS/MS對(duì)加入內(nèi)標(biāo)的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和加入內(nèi)標(biāo)的待測(cè)樣品溶液進(jìn)行檢測(cè)，所述內(nèi)標(biāo)為木荊黃素；

（4）色譜與質(zhì)譜條件如下：

色譜條件：色譜柱為zorbax sb-c18 column，規(guī)格為 100 mm × 2.1 mm×1.8 m；流動(dòng)相為A相為水/甲酸，體積比99.9:0.1；B相為乙腈/甲酸，體積比99.9:0.1；流速維持在0.3 mL/min，柱溫30℃，梯度洗脫：0～2.0 min，5％ B；2．0～10.0 min，5％ B→25％B；10.0～12.0 min，25％B→95％B；12.0～15.0min，95％B，進(jìn)樣量3μL；

（5）質(zhì)譜條件：氮?dú)鉁囟?350℃，干燥氣流速11 L/min，毛細(xì)管電壓3.0 kV，霧化氣壓45 psi. MRM模式下掃描的離子對(duì)分別是：蘆丁 m/z 611.2→303.1、槲皮素 m/z 303.1→152.9、山奈酚苷 m/z 595.2→287.0、紫云英苷 m/z 449.1→287.0、柚皮苷 m/z 581.2→273.1、柚皮素 m/z 273.1→153.1、異甘草素m/z 257.1→137.1、木荊黃素 m/z 433.1→313.1；

（6）通過(guò)數(shù)據(jù)分析軟件分析原始數(shù)據(jù)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)鮮煙葉中多種類(lèi)黃酮代謝組學(xué)方法，其特征在于：新鮮煙葉凍干粉末與濃度60-90%甲醇的比例為質(zhì)量體積比1∶50-100，單位g/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測(cè)鮮煙葉中多種類(lèi)黃酮代謝組學(xué)方法，其特征在于：步驟（6）中的數(shù)據(jù)分析軟件為MassHunter Agilent 2003–2007 Data Acquisition for Triple Quad B.01.04 (B84) software。