[發明專利]一種鑒定食品中擬枝孢鐮刀菌的檢測試劑盒及檢測方法

在審

• 申請號: 201610265458.9
• 申請日: 2016-04-26
• 公開（公告）號: CN105671200A
• 公開（公告）日: 2016-06-15
• 發明（設計）人: 張梅
• 申請（專利權）人: 張梅
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種用于鑒定食品中的擬枝孢鐮刀菌的LAMP檢測試劑盒，其特征在于其包括特異性 引物組、反應緩沖液、BstDNA聚合酶和核酸染料，其中所述引物的核苷酸序列如下所示：

外引物F3：CCACATCTTCGGGTCTGTTG(SEQIDNO:1)

外引物B3：CCTTGGTGCCAACTTCCATT(SEQIDNO:2)

內引物FIP：TGGGAAACGGGCATTTGCTTG-CAGTGCCAAGTCAGCTCAT(SEQIDNO:3)

內引物BIP：ACCATATTCGAAAGCGGACGCG-GCAGTCTGGGTAACGACAG(SEQIDNO:4)。

2.根據權利要求1所述的擬枝孢鐮刀菌的LAMP檢測試劑盒，其中所述反應緩沖液由2mM dNTP、10×ThermoPol反應緩沖液、0.6mM甜菜堿和6mMMg²⁺組成。

3.根據權利要求1或2所述的擬枝孢鐮刀菌的LAMP檢測試劑盒，其中所述核酸染料為 1000×SYBRGreenI。

4.根據權利要求1-3任一項所述的擬枝孢鐮刀菌的LAMP檢測試劑盒，其進一步包括DNA 提取試劑以及陽性對照和陰性對照。

5.根據權利要求4所述的擬枝孢鐮刀菌的LAMP檢測試劑盒，其中所述DNA提取試劑是 CTAB抽提緩沖液。

6.一種鑒定食品中的擬枝孢鐮刀菌的方法，包括以下步驟：

(1)向待測樣品中加入CTAB抽提緩沖液，按照常規CTAB法提取DNA；

(2)在PCR管中制備25μl反應體系，其包括0.2μmol/μl的外引物F31μl、0.2μmol/μl的 外引物B31μl、1.2μmol/μl的內引物FIP1μl、1.2μmol/μl的內引物BIP1μl、反應緩沖液 2.5μl、8U/μl的BstDNA聚合酶1μl、模板DNA2μl，加水補充至25μl，并以擬枝孢鐮刀菌基因 組DNA作為陽性對照，以100mMTris-HClpH8.0和50mMEDTA作為陰性對照；

(3)將步驟(2)中的PCR管于63℃恒溫反應60min；

(4)分析判斷反應產物結果：在(3)中所得反應產物中加入1μl核酸染料SYBRGreenI， 如反應液顏色為橙色，表示結果為陰性，食品中不含擬枝孢鐮刀菌，如反應液顏色為綠色， 表示結果為陽性。