[發明專利]一種檢測豬O型口蹄疫病毒抗體的方法及其專用試劑盒

在審

• 申請號: 201610265392.3
• 申請日: 2016-04-26
• 公開（公告）號: CN105759058A
• 公開（公告）日: 2016-07-13
• 發明（設計）人: 劉文軍;楊利敏;李晶;崔辰;張爽;范文輝
• 申請（專利權）人: 中國科學院微生物研究所
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/569
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種檢測豬O型口蹄疫病毒抗體的方法及其專用試劑盒。

背景技術

口蹄疫病毒(Foot-and-mouthdiseasevirus,FMDV)可引偶蹄動物的急性、熱性、高度接觸性傳染病，即通常所說的口蹄疫(FootandMouthDisease,FMD)。該病毒引起的病害具有傳播迅速、感染率高的特點，主要通過呼吸道和消化道傳播，僅數個感染性病毒粒子便可引起易感動物發病，甚至造成世界性的大流行，給畜牧業帶來及其嚴重的經濟損失，因此FMDV是世界各國檢疫和防疫的重點對象。FMDV為單股正鏈RNA病毒，基因組全長約8.5kb，編碼組成病毒衣殼的蛋白為4種結構蛋白VP1、VP2、VP3和VP4以及10種成熟的非結構蛋白(L、2A、2B、2C、3A、3B、3C、3D及3AB和3ABC復合體)。在FMDV的4種結構蛋白中，VP1攜帶引發宿主細胞對FMDV免疫反應的關鍵性抗原表位，暴露于病毒粒子表面，單獨的VP1蛋白即可刺激機體產生中和抗體，是ELISA中有效的目標抗原。

目前7個血清型中的O型、A型和Asia1型在中國交替流行，涉及面廣、疫情復雜、破壞性強，造成很大危害。當前我國預防和控制口蹄疫主要以疫苗免疫為主，但FMDV的血清型眾多，不同亞型的疫苗之間無交叉保護作用，且國內外口蹄疫疫苗質量參差不齊，因此建立一種簡便、快速、靈敏度高的FMDV感染和/或免疫后抗體檢測方法對預防和控制口蹄疫的發生和流行具有十分重要的意義。

FMDV的檢測方法分為三類，包括血清學診斷技術、生物學試驗和分子生物學診斷技術。在血清學診斷技術中，OIE推薦的檢測FMDV抗體的標準方法為中和試驗，但中和試驗需要使用活病毒，在普通實驗室難以完成，且操作費時。酶聯免疫吸附分析法(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)與中和試驗相比，具有靈敏、快速、操作簡便等優點。化學發光酶聯免疫檢測(Chemiluminescentenzymeimmunoassay,CLEIA)是將化學發光體系與ELISA技術相結合，用于檢測微量抗原或抗體的一種新型標記免疫測定技術，利用標記酶促進發光底物發光，放大信號，具有靈敏度高、分析方法簡單快捷、檢測時間短、診斷范圍寬、特異性好的優點，繼承了ELISA的優點，同時靈敏度是ELISA的10倍以上，精密度明顯高于ELISA，不需要特殊、大型、昂貴設備。

發明內容

本發明一個目的是提供一種檢測豬O型口蹄疫病毒抗體的化學發光酶聯免疫試劑盒。

本發明提供的試劑盒，包括抗原蛋白或抗原蛋白溶液，所述抗原蛋白為如下a或b或c：

a)序列表中序列2所示的蛋白質；

b)在序列2所示的蛋白質的N端和/或C端連接標簽得到的融合蛋白質；

c)將a)或b)所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能由序列2衍生的蛋白質。

上述試劑盒中，所述抗原蛋白溶液的濃度為20μg/mL。

上述試劑盒中，所述試劑盒還包括包被液、酶標二抗、化學發光物質、化學發光檢測儀和可讀性載體；

所述可讀性載體上記載了利用所述抗原蛋白溶液和所述酶標二抗檢測的CLEIA方法。

上述試劑盒中，所述CLEIA檢測方法包括如下步驟：

1)將所述抗原蛋白溶液包被孔板；

2)依次將待測樣本、所述酶標二抗和所述化學發光物質加入1)處理后的孔板，反應，用所述化學發光檢測儀檢測化學發光值，得到待測樣本化學發光值；

3)根據所述待測樣本化學發光值判斷待測樣本是否感染感染豬O型口蹄疫病毒。

上述試劑盒中，所述根據化學發光值判斷待測樣本是否感染感染豬O型口蹄疫病毒為若待測樣本化學發光值大于等于31141，則待測樣本感染或候選感染豬O型口蹄疫病毒；若待測樣本化學發光值小于31141，則待測樣本未感染或候選未感染豬O型口蹄疫病毒。

上述試劑盒中，所述可讀性載體為試劑盒說明書。

本發明另一個目的是提供一種檢測或輔助檢測待測樣本是否感染豬O型口蹄疫病毒或待測樣本是否含有豬O型口蹄疫病毒抗體的方法。

本發明提供的方法，為上述試劑盒中的所述CLEIA方法。

本發明第三個目的是提供一種檢測或輔助檢測待測豬O型口蹄疫疫苗是否免疫合格的方法。

本發明提供的方法，包括如下步驟：