[發(fā)明專利]一種滁菊葉片離體高效再生的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201610262030.9 | 申請日： | 2016-04-22 |
| 公開（公告）號： | CN105918119B | 公開（公告）日： | 2017-12-05 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 侯金艷;吳麗芳;毛穎基;李明浩;趙華;馬朝東 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國科學(xué)院合肥物質(zhì)科學(xué)研究院 |
| 主分類號： | A01H4/00 | 分類號： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 合肥市浩智運專利代理事務(wù)所(普通合伙)34124 | 代理人： | 丁瑞瑞 |
| 地址： | 230000 安徽*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 葉片 高效 再生 方法 | ||
1.一種滁菊葉片離體高效再生的方法，其特征在于：包括以下步驟：
1)取材：選取滁菊葉片作為外植體；
2)切片：將步驟1)中的滁菊葉片進(jìn)行切片；
3)愈傷組織的誘導(dǎo):將步驟2)中的切片接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的誘導(dǎo)培養(yǎng)；
4)愈傷組織的增殖：將步驟3)中誘導(dǎo)的切片愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的增殖；
5)愈傷組織的分化：將步驟4)中增殖后的愈傷組織切塊并轉(zhuǎn)接于分化培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化；
6)不定芽的增殖和伸長：將步驟5)中分化出不定芽的愈傷組織轉(zhuǎn)接于不定芽增殖和伸長培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽的增殖和伸長培養(yǎng)；
7)生根：待不定芽伸長至2～3cm,并伴有2～3個完全伸展的葉子時進(jìn)行生根培養(yǎng)；
其中，所述步驟3)中愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基包括MS+0.1～3.0mg/L TDZ+0.01～0.05mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂,pH＝5.8；
所述步驟4)中愈傷組織增殖培養(yǎng)基為MS+0.2～2.0mg/L TDZ+30g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂,pH＝5.8；
所述步驟5)中愈傷組織的分化培養(yǎng)基為MS+0.2～1.0mg/L TDZ+0.05～0.2mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂,pH＝5.8；
所述步驟6)中不定芽增殖和伸長培養(yǎng)基為MS+0.5～2.0mg/L 6-BA+0.05～0.2mg/L TDZ+0.2～2.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂,pH＝5.8；
所述步驟7)中的生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.05～0.3mg/L IBA+0.05～0.5mg/L IAA+20g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂,pH＝5.8。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滁菊葉片離體高效再生的方法，其特征在于：所述步驟1)的滁菊葉片為田間滁菊優(yōu)良株系當(dāng)年生幼嫩枝條的葉片或離體再生所獲得的滁菊無菌苗完全伸展的葉片。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種滁菊葉片離體高效再生的方法，其特征在于：所述滁菊葉片離體高效再生的方法還包括表面消毒；表面消毒：將步驟1)中取材于田間的當(dāng)年生幼嫩枝條的葉片經(jīng)75％的無水乙醇擦拭一遍后，無菌工作臺中用無菌水沖洗2～3遍；然后用75％的無水乙醇消毒10～25s后，用無菌水清洗2～3遍；然后用0.1％HgCl2溶液消毒1～3min,無菌水沖洗5～6遍。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滁菊葉片離體高效再生的方法，其特征在于：光照培養(yǎng)14～16d后，將步驟3)中誘導(dǎo)的葉片愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的增殖。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滁菊葉片離體高效再生的方法，其特征在于：光照培養(yǎng)10～14d后，將步驟4)中增殖后的愈傷組織切成(0.4～0.5)×(0.4～0.5)cm2大小的切塊并轉(zhuǎn)接于分化培養(yǎng)基中進(jìn)行愈傷組織的分化。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種滁菊葉片離體高效再生的方法，其特征在于：光照培養(yǎng)21～28d后，將步驟5)中分化出不定芽的愈傷組織轉(zhuǎn)接于不定芽增殖和伸長培養(yǎng)基中進(jìn)行不定芽的增殖和伸長培養(yǎng)。
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