[發明專利]一種滁菊葉片離體高效再生的方法

有效

• 申請號: 201610262030.9
• 申請日: 2016-04-22
• 公開（公告）號: CN105918119B
• 公開（公告）日: 2017-12-05
• 發明（設計）人: 侯金艷;吳麗芳;毛穎基;李明浩;趙華;馬朝東
• 申請（專利權）人: 中國科學院合肥物質科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 合肥市浩智運專利代理事務所(普通合伙)34124
• 代理人: 丁瑞瑞

技術領域

本發明涉及生物技術領域，尤其涉及一種滁菊葉片離體高效再生的方法。

背景技術

滁菊(Dendranthema morifolium CV.‘chuju’),為滁州市特有的傳統產品，為重要的中草藥及經濟作物，有滁州貢菊之稱。屬藥、茶兼用佳品，具有極高的藥用和保健價值，在中國已有幾百年的栽培歷史。長期飲用滁菊具有清熱解毒、舒筋活血、護肝明目、增強人體免疫力等功能，同時對冠心病、高血壓療效顯著。滁菊名列安徽省“四大”著名道地藥材之首和中國“四大”藥菊之首。目前，滁菊已經成為滁州當地支柱產業，在滁州地區大面積種植。

但目前在生產上，由于滁菊長期采用扦插和分株等傳統的無性繁殖手段進行繁殖，使得滁菊普遍存在品種退化、病蟲害嚴重、相關品種改良和更新速度慢等問題，大大限制了以滁菊作為藥、茶兼用佳品進行大規模栽培和產業化的應用。因此，加強其品種改良，培育高產、優質且抗蟲滁菊優良品種是當前發展滁菊產業最為迫切的任務。目前有關滁菊育種的研究，主要集中在利用雜交手段進行，遠不能適應菊農對品種產量和品質的要求。

由于利用組織培養技術可在短期內可獲得大量的無菌苗，可在實現滁菊的優良種質資源規?；a的同時，使得加速滁菊的品種改良進程成為可能。目前有關滁菊離體再生的研究較少，其中利用滁菊葉片為外植體進行離體再生的研究已有報道，但普遍存在繁殖系數低、可重復性差、外植體易變黑死亡和分化過程玻璃化現象嚴重等問題，嚴重限制了葉片在滁菊離體快繁中的應用。針對上述滁菊種植中所存在的諸多問題，同時為了滿足規模化種植和品種改良對滁菊優質種苗的需求，急需開發一種滁菊葉片離體高效再生的方法。

發明內容

本發明的目的在于運用植物組織培養技術，提供一種滁菊葉片離體高效再生的方法。為了實現上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種滁菊葉片離體高效再生的方法，包括以下步驟：

1)取材：選取滁菊葉片作為外植體；

2)切片：將步驟1)中的滁菊葉片進行切片；

3)愈傷組織的誘導:將步驟2)中的切片接種于愈傷組織誘導培養基中進行愈傷組織的誘導培養；

4)愈傷組織的增殖：將步驟3)中誘導的切片愈傷組織接種于增殖培養基中進行愈傷組織的增殖；

5)愈傷組織的分化：將步驟4)中增殖后的愈傷組織切塊并轉接于分化培養基中進行愈傷組織的分化；

6)不定芽的增殖和伸長：將步驟5)中分化出不定芽的愈傷組織轉接于不定芽增殖和伸長培養基中進行不定芽的增殖和伸長培養；

7)生根：待不定芽伸長至2～3cm,并伴有2～3個完全伸展的葉子時進行生根培養。

優選地，所述步驟1)的滁菊葉片為田間滁菊優良株系當年生幼嫩枝條的葉片或離體再生所獲得的滁菊無菌苗完全伸展的葉片。

優選地，所述滁菊葉片離體高效再生的方法還包括表面消毒；表面消毒：將步驟2)中取材于田間的當年生幼嫩枝條的葉片經75％的無水乙醇擦拭一遍后，無菌工作臺中用無菌水沖洗2～3遍；然后用75％的無水乙醇消毒10～25s后，用無菌水清洗2～3遍；然后用0.1％HgCl2溶液消毒1～3min,無菌水沖洗5～6遍。

優選地，所述步驟3)中愈傷組織誘導培養基包括MS+0.1～3.0mg/L TDZ+0.01～0.05mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂，pH＝5.8。

優選地，光照培養14～16d后，將步驟3)中誘導的葉片愈傷組織接種于增殖培養基中進行愈傷組織的增殖；其中愈傷組織增殖培養基為MS+0.2～2.0mg/L TDZ+30g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂,pH＝5.8。

優選地，光照培養10～14d后，將步驟4)中增殖后的愈傷組織切成(0.4～0.5)×(0.4～0.5))cm²大小的切塊并轉接于分化培養基中進行愈傷組織的分化；其中愈傷組織的分化培養基為MS+0.2～1.0mg/L TDZ+0.05～0.2mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂,pH＝5.8。

優選地，光照培養21～28d后，將步驟5)中分化出不定芽的愈傷組織轉接于不定芽增殖和伸長培養基中進行不定芽的增殖和伸長培養；其中不定芽增殖和伸長培養基為MS+0.5～2.0mg/L 6-BA+0.05～0.2mg/L TDZ+0.2～2.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.0g/L瓊脂,pH＝5.8。