[發明專利]一種基于核酸適配體的酶聯免疫吸附技術檢測石斑魚虹彩病毒感染的方法

在審

• 申請號: 201610259525.6
• 申請日: 2016-04-22
• 公開（公告）號: CN105785024A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發明（設計）人: 秦啟偉;李鵬飛;魏世娜;周伶俐
• 申請（專利權）人: 中國科學院南海海洋研究所
• 主分類號: G01N33/58
• 分類號: G01N33/58;G01N33/569;G01N33/543
• 代理公司: 廣州科粵專利商標代理有限公司 44001
• 代理人: 朱聰聰;劉明星

1.一種基于核酸適配體的酶聯免疫吸附技術檢測石斑魚虹彩病毒感染的方法，其特征 在于，包括以下步驟：

(1)、將SEQIDNO.1～3所示的任意一條生物素標記的石斑魚虹彩病毒核酸適配體與 待測樣品進行結合，然后清洗；

(2)、將步驟(1)中結合了核酸適配體的樣品進行離心，移除上清，將富集到的樣品與辣 根過氧化物酶-鏈霉親和素混勻進行結合；

(3)、步驟(2)得到的結合了辣根過氧化物酶-鏈霉親和素的樣品進行清洗，然后移入酶 標板中，每孔加入TMB顯色液避光反應，最后加入終止液終止反應；

(4)、檢測待測樣品在450nm處的吸光值，根據吸光值的變化來判斷樣品室是否被石斑 魚虹彩病毒感染。

2.根據權利要求1所述的基于核酸適配體的酶聯免疫吸附技術檢測石斑魚虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步驟(1)的生物素標記的石斑魚虹彩病毒核酸適配體與待測樣品結 合前先進行復性，具體為：將生物素標記的核酸適配體在94℃高溫變性10min，然后迅速插 入到冰中復性10min。

3.根據權利要求1所述的基于核酸適配體的酶聯免疫吸附技術檢測石斑魚虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步驟(1)所述的核酸適配體與待測樣品結合，為200nM的核酸適配體 與200μl的待測樣品結合。

4.根據權利要求1所述的基于核酸適配體的酶聯免疫吸附技術檢測石斑魚虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步驟(1)所述的結合，結合時間為1～30min，結合溫度為4～37℃。

5.根據權利要求1所述的基于核酸適配體的酶聯免疫吸附技術檢測石斑魚虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步驟(1)所述的清洗，是用PBS清洗3次。

6.根據權利要求1所述的基于核酸適配體的酶聯免疫吸附技術檢測石斑魚虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步驟(2)所述的辣根過氧化物酶-鏈霉親和素混勻結合，辣根過氧化 物酶：鏈霉親和素的體積比為1:10000，添加量為200μl，結合時間為15min。

7.根據權利要求1所述的基于核酸適配體的酶聯免疫吸附技術檢測石斑魚虹彩病毒感 染的方法，其特征在于，步驟(3)所述的清洗，是用PBS清洗5次；所述的酶標板為96孔酶標 板；所述的TMB顯色液避光反應，為加入100μl避光反應10min；所述的加入終止液，為加入50 μl2M的H₂SO₄。