[發明專利]適合代謝組學水牛胚胎培養及檢測胚胎發育潛能的方法

在審

• 申請號: 201610259350.9
• 申請日: 2016-04-25
• 公開（公告）號: CN106635963A
• 公開（公告）日: 2017-05-10
• 發明（設計）人: 陸陽清;許惠艷;盧克煥;朱平川
• 申請（專利權）人: 廣西大學
• 主分類號: C12N5/073
• 分類號: C12N5/073;G01N30/02
• 代理公司: 廣西南寧公平知識產權代理有限公司45104
• 代理人: 楊立華

1.一種適合代謝組學的水牛胚胎培養方法，其特征在于：第一步，取未成熟的水牛卵母細胞，經體外成熟、體外受精后獲得假定受精胚胎進行群體培養；第二步，待胚胎發育到囊胚階段，進行單胚胎培養。

2.根據權利要求1所述的適合代謝組學的水牛胚胎培養方法，其特征在于按以下操作進行：取未成熟的水牛卵母細胞進行體外成熟，將體外成熟的卵子經體外受精后，把假定受精胚胎放到共培養液體系中，微滴群體培養；待胚胎發育到囊胚階段，用撿卵針撿出囊胚，用PBS溶液洗滌1-2次，放入事先在培養箱中平衡2h以上的20μl蓋油的SOF液培養，每個胚胎一滴，于培養箱中繼續培養5-6h后，收集代謝液到200μl的EP管中-80℃凍存。

3.一種檢測水牛胚胎發育潛能的方法，其特征在于按權利要求1所述培養方法進行培養，單胚胎培養后收集代謝液；通過LC/MS檢測囊胚代謝液成分，通過PCA數據分析鑒定胚胎發育能力。

4.根據權利要求3所述的檢測水牛胚胎發育潛能的方法，其特征在于所述代謝液按以下操作進行預處理：首先把樣品從-80℃冰箱中，放入冰面上解凍，然后用超純水預洗滌一次膜的Merck Millipore離心過濾管，4度12000g.min^-1離心15min。

5.根據權利要求4所述的檢測水牛胚胎發育潛能的方法，其特征在于所述LC/MS檢測條件及參數按以下設置：

選擇前用乙晴沖洗柱子15min，用95％的0.1％甲酸水平衡柱子15min；

選擇方法：液相，A相0.1％甲酸水，B相100％乙腈；其中，

0-2min 5％乙腈，

2-20min 5％乙腈-95％乙腈，

20min-23min 100％乙晴，

23min-23.1min 5％乙晴，

23.1min-25min 5％乙晴，

流速為0.30mL/min；進樣量：2μL；

一級質譜參數：

二級質譜參數：

HEST SOURCE參數：