[發(fā)明專利]重組核酸片段RecCR010374及其檢測(cè)引物與應(yīng)用有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201610258497.6 | 申請(qǐng)日： | 2016-04-22 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN107304446B | 公開（公告）日： | 2021-11-26 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 喻輝輝;周發(fā)松;張學(xué)堂;邱樹青;何宗順;雷昉;姚玥;潘麗;李旭;李菁;韋懿;陳光;何予卿;楊毅;張啟發(fā) | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 中國種子集團(tuán)有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6895 | 分類號(hào)： | C12Q1/6895;C12N15/11;A01H1/02;A01H1/04 |
| 代理公司： | 北京路浩知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 100045 北京市西*** | 國省代碼： | 北京;11 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 重組 核酸 片段 reccr010374 及其 檢測(cè) 引物 應(yīng)用 | ||
1.具稻瘟病抗性的水稻植株的選育方法，其特征在于，步驟如下：
1)以‘中種恢629’為輪回親本，‘華130B’為供體親本進(jìn)行雜交，將輪回親本與供體植物進(jìn)行雜交，將所得到的雜交種與輪回親本進(jìn)行回交，獲得回交一代，利用正向選擇標(biāo)記PiC11ID17和負(fù)向選擇標(biāo)記PiC11S122、PiC11S166對(duì)其進(jìn)行抗稻瘟病基因組片段的單側(cè)同源重組片段篩選，并利用水稻全基因組育種芯片對(duì)其進(jìn)行背景選擇；
2)選擇背景回復(fù)值超過75％的重組單株與輪回親本再次進(jìn)行回交，獲得回交二代，利用正向選擇標(biāo)記PiC11ID17對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，選擇含有抗稻瘟病基因組片段的重組單株，然后利用水稻全基因組育種芯片對(duì)其進(jìn)行背景選擇；
3)選擇背景回復(fù)值超過87.5％的重組單株與輪回親本又一次進(jìn)行回交，獲得回交三代，利用正向選擇標(biāo)記PiC11ID17和負(fù)向標(biāo)記PiC11S122、PiC11S166對(duì)其進(jìn)行抗稻瘟病基因組片段的另一側(cè)同源重組片段篩選，并利用水稻全基因組育種芯片對(duì)其進(jìn)行背景選擇；
4)選擇導(dǎo)入片段小，且背景回復(fù)值超過93.75％的重組單株，將選中的重組單株自交一次，獲得自交種，利用正向選擇標(biāo)記PiC11ID17對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，并利用水稻全基因組育種芯片對(duì)其進(jìn)行背景選擇，最終獲得含抗稻瘟病基因組重組核酸片段純合且背景回復(fù)值超過99％的水稻植株；
擴(kuò)增標(biāo)記PiC11ID17的引物對(duì)為：
正向引物：5’-GTACTGGAGGATCAGGACTGG-3’，
反向引物：5’-CTGTTGCCTTGTGACTGTGAG-3’；
擴(kuò)增標(biāo)記PiC11S122的引物對(duì)為：
正向引物：5’-TACGACCGTGACATGTCCTT-3’，
反向引物：5’-ATTAACCACCATGCTCACCA-3’；以及
擴(kuò)增標(biāo)記PiC11S166的引物對(duì)為：
正向引物：5’-TTAGCCCCTCTCTCTCTCCA-3’，
反向引物：5’-GCCAGATCTAGCAGAGGTGA-3’；
所述水稻全基因組育種芯片為RICE60K。
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