[發(fā)明專利]利用玻璃化超低溫離體保存扁桃休眠芽的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610258196.3
• 申請日: 2016-04-23
• 公開（公告）號: CN105746496B
• 公開（公告）日: 2018-06-01
• 發(fā)明（設計）人: 姜喜;于軍;焦培培;陳加利;趙書珍;黨艷青;徐冰冰
• 申請（專利權(quán)）人: 塔里木大學
• 主分類號: A01N3/00
• 分類號: A01N3/00
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

本發(fā)明屬于果樹栽培和植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用玻璃化超低溫離體保存扁桃休眠芽的方法。本發(fā)明公開了一種利用玻璃化超低溫離體保存扁桃休眠芽的預處理液、裝載培養(yǎng)液、洗滌液、玻璃化液、生長培養(yǎng)基和恢復培養(yǎng)基。所述步驟為：1)從健康扁桃植株上剝?nèi)『??2個葉原基的0.6～1.5mm休眠芽莖尖，放入預處理液中預培養(yǎng)1d；2)室溫下用裝載液裝載20min，0℃下用玻璃化液處理70min，再加入少量新鮮玻璃化液后迅速投入液氮罐，保存15d后取出；3)40℃水浴鍋中化凍2～3min，用洗滌液卸載30min，吸干洗滌液后轉(zhuǎn)至恢復培養(yǎng)基24℃暗培養(yǎng)7d后轉(zhuǎn)光照下培養(yǎng)。本發(fā)明的成活率可達61.01％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于果樹栽培和植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用玻璃化超低溫離體保存扁桃休眠芽的方法。

背景技術(shù)

扁桃(Amygdalus communis L.)屬薔薇科(Rosaceae)李亞科(Prunoideae)桃屬(Amygdalus)扁桃亞屬(Subg.Amygdalus)植物，俗稱巴旦杏，其種仁具有很高的營養(yǎng)價值和經(jīng)濟價值，深受廣大人民的喜愛，為世界四大干果之一，起源于中亞細亞，約6000年的栽培歷史，大面積栽培始于19世紀后期。目前扁桃的引種栽培遍及美國、西班牙、希臘、意大利、土耳其等32個國家和地區(qū)，其中美國的栽培面積及產(chǎn)量均居世界之首。扁桃品種極其豐富，據(jù)報道，全世界有扁桃品種4000余個，我國自行培育和引進的品種有200多個，其中新疆約有90多個。主要集中在中國新疆南疆的喀什、疏勒、疏附、英吉沙、葉城、澤普及和田等地，栽培面積約為10000hm2。

目前，由于自然因素和人為活動的影響，扁桃呈現(xiàn)品種混雜、抗逆性差，甚至部分品種面臨遺失的危險。超低溫保存一般是在液氮(-196℃)條件下保存植物細胞、組織或器官，使植物種質(zhì)的新陳代謝活動基本停止，無限期地保持種質(zhì)的遺傳穩(wěn)定性，對種質(zhì)資源長期保存發(fā)揮重要作用。玻璃化超低溫保存可以節(jié)省空間，避免繼代、病蟲害和氣候等因素造成的種質(zhì)丟失，并且設備簡單，操作簡便，是一種植物細胞和組織長期穩(wěn)定保存的理想方法。目前該方法已經(jīng)成功地應用于菠蘿、蘋果、馬鈴薯、草莓、刺梨等園藝植物的莖尖玻璃化超低溫保存上，在柿和麻花秦艽等植物的休眠芽上也取得了較好的保存效果。

迄今為止，尚未見到利用玻璃化超低溫離體保存扁桃休眠芽的方法的報道。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種利用玻璃化超低溫離體保存扁桃休眠芽的方法，所述的方法具有簡單、快速和有效保存扁桃植物種質(zhì)資源的特點，通過本發(fā)明的實施，使扁桃休眠芽的成活率達到61.01％以上。

本發(fā)明通過下列技術(shù)方案實現(xiàn)：

一種利用玻璃化超低溫離體保存扁桃休眠芽的方法，包括配制預處理液、裝載培養(yǎng)液、洗滌液、玻璃化液PVS2、生長培養(yǎng)基和恢復培養(yǎng)基；

預處理液：MS，附加0.5mol/L蔗糖；用蒸餾水定容至1L；

裝載培養(yǎng)液：MS，附加2mol/L甘油和0.4mol/L蔗糖；用蒸餾水定容至1L；

洗滌液：MS，附加1.2mol/L蔗糖；用蒸餾水定容至1L；

玻璃化液PVS2：30％甘油，15％二甲基亞砜，15％乙二醇，0.4mol/L蔗糖；用蒸餾水定容至1L；

生長培養(yǎng)基：MS，附加6-BA 0.3mg/L，IAA 0.5mg/L,用蒸餾水定容至1L，pH值為5.8；

恢復培養(yǎng)基：MS，附加6-BA 0.3mg/L，IAA 1.0mg/L,用蒸餾水定容至1L，pH值為5.8；

按照以下步驟：