[發(fā)明專利]一種快速檢測流行性出血熱病毒IgM抗體的試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610257006.6
• 申請日: 2016-04-21
• 公開（公告）號: CN105785000A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發(fā)明（設計）人: 盧連偉
• 申請（專利權）人: 盧連偉
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 貴陽派騰陽光知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 52110
• 代理人: 管寶偉

1.一種快速檢測流行性出血熱病毒EHF-IgM抗體的試劑盒，包括盒體和檢 測卡，其特征在于，所述檢測卡包括殼體和試劑條，所述試劑條包括底板、吸水 濾紙、硝酸纖維素膜和樣品墊，所述樣品墊包括保護墊和膠體金層。

2.如權利要求1所述的一種快速檢測流行性出血熱病毒EHF-IgM抗體的試 劑盒，其特征在于，所述的底板為PVC材料制得；所述硝酸纖維素膜上分別設 有包被抗EHFV重組抗原的多克隆抗體的檢測線和包被有抗鼠IgM抗體的質(zhì)控 線，所述檢測線采用抗EHFV重組抗原的多克隆抗體濃度為0.5～0.8mg/mL的包 被液進行包被，所述質(zhì)控線采用抗鼠IgM抗體濃度為1.0～1.5mg/mL的包被液 進行包被；所述的保護墊為玻璃纖維素膜。

3.如權利要求1所述的一種快速檢測流行性出血熱病毒EHF-IgM抗體的試 劑盒，其特征在于，制備方法為：

(1)膠體金溶液制備：將容器用純化水清洗干凈后，加入1wt％氯金酸水 溶液加熱至沸騰，再按0.5～0.8％的體積比滴加加入1.5wt％檸檬酸三鈉溶液， 攪拌混勻，膠體金溶液由灰白色變成紫色，繼續(xù)沸煮，膠體金溶液變成紅色調(diào)后， 停止加熱并冷卻，使用K2CO3溶液調(diào)節(jié)pH至8.0-9.0，備用；樣品墊制備：

a.用PBS緩沖液將EHFV特異性重組抗原稀釋至蛋白含量為0.3-0.5mg/mL 的稀釋液，再將稀釋液在5℃條件下3000r/min離心15-30min，去除沉淀得到上 清液，將上清液逐滴加入到(1)制備的膠體金溶液中，離心去除多余的抗原， 加入穩(wěn)定劑，在5℃條件下3000r/min離心30-45min，靜置5-8h后，給得到的沉 淀物中加入緩釋劑，即得到膠體金標記的EHFV特異性重組抗原；

b.將標記好膠體金的EHFV特異性重組抗原溶液均勻噴射到玻璃纖維素膜 上，冷凍干燥，再將玻璃纖維素膜粘貼在保護墊上，即制得所述的樣品墊。

(3)硝酸纖維素膜制備：將抗EHFV重組抗原的多克隆抗體稀釋成濃度為 0.5～0.8mg/mL的包被液，將抗鼠IgM抗體稀釋成濃度為1.0～1.5mg/mL的包被 液，將稀釋好的抗鼠IgM抗體均勻噴在硝酸纖維素膜上，得到檢測線；將稀釋 好的MP蛋白均勻噴在硝酸纖維素膜上，得到質(zhì)控線，37℃干燥4h，封存，即 得到所述的硝酸纖維素膜；

(4)試劑盒制備：給PVC底板上硝酸纖維素膜的上方粘帖吸水紙，硝酸纖 維素膜與吸水濾紙相互交疊0.2mm，在硝酸纖維素膜的下方依次粘貼樣品墊，樣 品墊上有觀測孔，硝酸纖維素膜和樣品墊之間相互交疊0.2mm，按3-5mm的寬 度切為小條，制得試劑條，將試劑條放在塑料殼體中，加上干燥劑，裝入盒體， 即制得一種快速檢測流行性出血熱病毒EHF-IgM抗體的試劑盒。