[發(fā)明專利]一種快速檢測流行性出血熱病毒IgM抗體的試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201610257006.6
• 申請日: 2016-04-21
• 公開（公告）號: CN105785000A
• 公開（公告）日: 2016-07-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 盧連偉
• 申請（專利權(quán)）人: 盧連偉
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558
• 代理公司: 貴陽派騰陽光知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 52110
• 代理人: 管寶偉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及體外診斷試劑領(lǐng)域，具體地涉及一種快速檢測流行性出血熱病毒 IgM抗體的試劑盒。

背景技術(shù)

流行性出血熱又稱腎綜合征出血熱，是由漢坦病毒引起的自然疫源性疾病。 具有發(fā)熱、出血、腎損害三大主要特征。流行廣，病情危急，病死率高，危害極 大。老鼠(黑線姬鼠)是主要的傳染源，可經(jīng)過多種途徑傳播給人。流行性出血 熱病毒(EHFV)屬布尼亞病毒科(Bunyaviridae)，漢坦病毒屬(Hantavirus， HV)，現(xiàn)統(tǒng)稱漢坦病毒(HV)。流行性出血熱毒為有膜RNA病毒，形態(tài)有圓形， 卵圓形和長形三種，病毒核心為基因組RNA和核殼，外層為脂質(zhì)雙層包膜，表 面是糖蛋白，直徑70～210nm。

流行性出血熱發(fā)病地域廣泛，主要分布于歐亞兩大洲，包括中國、朝鮮、日 本、原蘇聯(lián)、蘇蘭、丹麥、瑞典、挪威、荷蘭、波蘭、捷克、斯洛伐克、匈牙利、 羅馬尼亞、保加利亞、南斯拉夫、希臘、瑞士、比利時(shí)、英國和法國等。近些年， 在中國的發(fā)病率一直呈上升趨勢，鼠類是主要傳染源，在我國農(nóng)村的主要傳染源 是黑線姬鼠和褐家鼠。東北林區(qū)的主要傳染源是大林姬鼠。城市的主要傳染源是 褐家鼠，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物室的主要傳染源是大白鼠。此外，黃胸鼠、小家鼠、巢鼠、普 通田鼠等亦可為流行性出血熱的傳染源。發(fā)病機(jī)理主要是一方面病毒感染能導(dǎo)致 感染細(xì)胞功能和結(jié)構(gòu)的損害，另一方面病毒感染誘發(fā)人體的免疫應(yīng)答和各種細(xì)胞 因子的釋放，既有清除感染病毒，保護(hù)機(jī)體的作用，又能引起機(jī)體組織損傷的不 利作用。一般認(rèn)為漢坦病毒進(jìn)入人體后隨血流到達(dá)全身，病毒首先與血小板、內(nèi) 皮細(xì)胞和單核細(xì)胞表面表達(dá)的受體p3整聯(lián)蛋白相結(jié)合，然后進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)以及肝、 脾、肺、腎等組織，進(jìn)一步復(fù)制后再釋放進(jìn)入血流，引起病毒血癥，由于病毒感 染和感染后誘發(fā)的免疫反應(yīng)，以及多種細(xì)胞因子的釋放，導(dǎo)致細(xì)胞變性、壞死或 凋亡，因而器官功能受損。由于漢坦病毒對人體呈泛嗜性感染，因而能引起多器 官損害。

目前對EHFV的檢驗(yàn)主要是實(shí)驗(yàn)室檢查：血象白細(xì)胞總數(shù)增高，分類中淋 巴細(xì)胞增多，并有異常淋巴細(xì)胞，血小板數(shù)下降，尿檢有蛋白、紅細(xì)胞、白細(xì)胞、 管型等，這些只能對EHFV起到輔助診斷的作用，檢測周期長，準(zhǔn)確率低，近 些年來血清學(xué)方法檢測有助于病人早期診斷，對臨床不典型的病人尤有助于診 斷，因此人體血清中的EHF-IgM抗體陽性對流行性出血熱有很好的確診價(jià)值。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種快速檢測流行性出血熱病毒IgM抗體的試劑 盒。本發(fā)明所提供的檢測試劑盒利用膠體金免疫層析技術(shù)，快速直觀的檢測出 EHFV中IgM抗體從而有利于流行性出血熱患者的早期診斷。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：一種快速檢測流行性出血熱病毒EHF-IgM抗體的試 劑盒，包括盒體和檢測卡，所述檢測卡包括殼體和試劑條，所述試劑條包括底板、 吸水濾紙、硝酸纖維素膜和樣品墊，所述樣品墊包括保護(hù)墊和膠體金層。

進(jìn)一步的，所述的底板為PVC材料制得，PVC作為醫(yī)用材料，具有良好的 生物相容性，不致畸致癌，不引起過敏反應(yīng)，還有很好的血液相容性、溶血性低、 抗凝血性好；所述硝酸纖維素膜上分別設(shè)有包被抗EHFV重組抗原的多克隆抗 體的檢測線和包被有抗鼠IgM抗體的質(zhì)控線，所述檢測線采用抗EHFV重組抗 原的多克隆抗體濃度為0.5～0.8mg/mL的包被液進(jìn)行包被，所述質(zhì)控線采用抗鼠 IgM抗體濃度為1.0～1.5mg/mL的包被液進(jìn)行包被；所述的保護(hù)墊為玻璃纖維素 膜。

一種快速檢測流行性出血熱病毒EHF-IgM抗體的試劑盒的制備方法為：

(1)膠體金溶液制備：將容器用純化水清洗干凈后，在35-45℃溫度下烘干， 加入1wt％氯金酸水溶液加熱至沸騰，再按0.5～0.8％的體積比滴加加入1.5wt％ 檸檬酸三鈉溶液，攪拌混勻，膠體金溶液由灰白色逐漸變成紫色，繼續(xù)沸煮，膠 體金溶液變成紅色調(diào)后，停止加熱并冷卻，使用0.1-0.5mol/LK2CO3溶液調(diào)節(jié) pH至8.0-9.0，備用；所述的膠體金顆粒粒徑為25納米～40納米；

(2)樣品墊制備：