[發(fā)明專利]一種通過懸浮培養(yǎng)快速繁育鐵蘭種苗的方法

有效

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• 申請日: 2016-04-22
• 公開（公告）號: CN105900837B
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李志英;徐立;符運(yùn)柳;李克烈;黃碧蘭
• 申請（專利權(quán)）人: 中國熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院熱帶作物品種資源研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 海口翔翔專利事務(wù)有限公司46001
• 代理人: 莫臻

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬植物栽培技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種鐵蘭種苗的繁殖方法，具體是一種利用鐵蘭葉片誘導(dǎo)形成的愈傷組織，誘導(dǎo)胚性愈傷組織及胚狀體，通過懸浮培養(yǎng)胚狀體增殖，再經(jīng)胚狀體萌發(fā)、不定芽生長、不定芽生根誘導(dǎo)、無菌苗移栽等過程，獲得大量種苗的繁育方法。

背景技術(shù)

鐵蘭(Tillandsia cyanea)，又稱扇鳳梨，屬于鳳梨科(Bromeliaceae)鐵蘭屬，是多年生單子葉植物，原產(chǎn)美洲熱帶及亞洲熱帶地區(qū)，約有500多個(gè)原生種，園藝栽培觀賞的約60種。鐵蘭莖短，植株相對來說比較矮小，總苞片可觀賞數(shù)月，屬迷你型觀賞性植物，具有很強(qiáng)的凈化空氣的能力，可用于美化環(huán)境，適于盆栽裝飾室內(nèi)，擺放于陽臺(tái)、窗臺(tái)、書桌等，也可懸掛在客廳、茶室、還可做插花陪襯材料。

鐵蘭通常用分株法繁殖，即在花后萌發(fā)的吸芽發(fā)育到一定大小時(shí)，從母株分離栽種，獲得新的植株。這種方法繁育種苗非常緩慢，繁殖系數(shù)很低，不能作為鐵蘭種苗批量繁育的方法。

利用組織培養(yǎng)技術(shù)繁育鐵蘭種苗是目前較為常用的方法，均通過不定芽增殖途徑獲得批量種苗。該方法周期相對較長，從取材到批量出苗需要2-3年時(shí)間，繁育過程中需要投入相對較多的人力和物力進(jìn)行多次批量繼代，才能獲得批量種苗，效率低，成本高。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種通過懸浮培養(yǎng)快速繁育鐵蘭種苗的方法，以鐵蘭葉片為材料進(jìn)行組織培養(yǎng)，可以在短時(shí)間內(nèi)獲得大量可用于生產(chǎn)栽培的種苗，所得種苗的生理年齡一致，生長整齊，前期培養(yǎng)周期短(每14d一代)，占地面積小，成本低，適合工廠化育苗和規(guī)模化栽培。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案：

一種通過懸浮培養(yǎng)快速繁育鐵蘭種苗的方法，包括愈傷組織誘導(dǎo)及增殖、胚性愈傷組織液體懸浮、胚狀體萌發(fā)不定芽、不定芽誘導(dǎo)生根、移栽和管理過程，其步驟如下：

1、愈傷組織誘導(dǎo)及增殖

取鐵蘭無菌苗葉片，切段后接種于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)40～50d，葉片基部分化出易碎的愈傷組織；將愈傷組織與葉片分離后，接種到新鮮的愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上繼續(xù)培養(yǎng)，愈傷組織增殖分化，形成淡黃色的大量疏松易碎的胚性愈傷組織。培養(yǎng)條件：培養(yǎng)溫度25～29℃，光照培養(yǎng)。光照時(shí)間10～12h/d，光照強(qiáng)度20～30μmol·m^-2·s^-1。所述愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加6-BA 2.0～3.0mg/L、NAA 0.02mg/L、蔗糖30g/L、卡拉膠6.5g/L，pH為5.8。

2、胚性愈傷組織液體懸浮

將疏松易碎的胚性愈傷組織塊輕輕壓碎，接種到繼代培養(yǎng)基Ⅰ中進(jìn)行黑暗懸浮培養(yǎng)，溫度25℃，轉(zhuǎn)數(shù)90rpm，每7d繼代1次，3次后，形成胚狀體；更換為繼代培養(yǎng)基Ⅱ，培養(yǎng)條件不變，延長繼代周期至每14d繼代1次。所述繼代培養(yǎng)基Ⅰ是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加2,4-D 0.1mg/L；所述繼代培養(yǎng)基Ⅱ是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加2,4-D 0.1mg/L、KT 0.05mg/L。

3、胚狀體萌發(fā)不定芽

將經(jīng)過繼代培養(yǎng)得到的胚狀體，接種到不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，25～30℃下暗培養(yǎng)，胚狀體開始逐漸變綠，發(fā)生毛狀體，培養(yǎng)90d后，萌發(fā)形成無根不定芽叢。所述不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加6-BA 1.0mg/L、NAA 0.01mg/L、蔗糖30g/L、卡拉膠6.5g/L，pH 5.8。

4、不定芽誘導(dǎo)生根

待不定芽伸長到2～3cm時(shí)，將不定芽叢進(jìn)行單株分離，接種到生根培養(yǎng)基上，25～30℃下暗培養(yǎng)，培養(yǎng)40d后，在不定芽的基部形成棕色的根，根上有根毛，部分分叉。所述生根培養(yǎng)基是以1/2MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，并添加NAA 1.0mg/L、IBA 0.5mg/L、蔗糖20g/L、卡拉膠6.5g/L，pH 5.8。

5、移栽和管理過程

A.出瓶方法：將生根苗連瓶放置在控溫大棚中煉苗，一周后將苗移出培養(yǎng)瓶外，洗凈小苗根部的培養(yǎng)基，進(jìn)行移栽；

B.基質(zhì)制作：分別取草炭土、椰糠和河沙，按體積比計(jì)：草炭土：椰糠：河沙＝3～5：2～4：1的比例配成基質(zhì)，提前澆透水，并覆蓋薄膜保濕；

C.移栽方法：將已經(jīng)濕透的基質(zhì)進(jìn)行淺翻，然后耙平，并用竹棒打孔，孔深0.5cm，將小苗根部輕輕放到孔中，并用周圍的基質(zhì)填充，稍壓實(shí)，并用噴霧的方法淋定根水；