[發明專利]一種通過懸浮培養快速繁育鐵蘭種苗的方法

有效

• 申請號: 201610254751.5
• 申請日: 2016-04-22
• 公開（公告）號: CN105900837B
• 公開（公告）日: 2017-10-20
• 發明（設計）人: 李志英;徐立;符運柳;李克烈;黃碧蘭
• 申請（專利權）人: 中國熱帶農業科學院熱帶作物品種資源研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 海口翔翔專利事務有限公司46001
• 代理人: 莫臻

1.一種通過懸浮培養快速繁育鐵蘭種苗的方法，其特征在于，包括愈傷組織誘導及增殖、胚性愈傷組織液體懸浮、胚狀體萌發不定芽、不定芽誘導生根、移栽和管理過程，其步驟如下：

1)、愈傷組織誘導及增殖

取鐵蘭無菌苗葉片，切段后接種于愈傷組織誘導培養基上，培養40～50d，葉片基部分化出易碎的愈傷組織；將愈傷組織與葉片分離后，接種到新鮮的愈傷組織誘導培養基上繼續培養，愈傷組織增殖分化，形成淡黃色的大量疏松易碎的胚性愈傷組織；培養條件：培養溫度25～29℃，光照培養，光照時間10～12h/d，光照強度20～30μmol·m^-2·s^-1；所述愈傷組織誘導培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加6-BA 2.0～3.0mg/L、NAA 0.02mg/L、蔗糖30g/L、卡拉膠6.5g/L，pH為5.8；

2)、胚性愈傷組織液體懸浮

將疏松易碎的胚性愈傷組織塊輕輕壓碎，接種到繼代培養基Ⅰ中進行黑暗懸浮培養，溫度25℃，轉數90rpm，每7d繼代1次，3次后，形成胚狀體；更換為繼代培養基Ⅱ，培養條件不變，延長繼代周期至每14d繼代1次；所述繼代培養基Ⅰ是以MS培養基為基本培養基，并添加2,4-D 0.1mg/L；所述繼代培養基Ⅱ是以MS培養基為基本培養基，并添加2,4-D 0.1mg/L、KT 0.05mg/L；

3)、胚狀體萌發不定芽

將經過繼代培養得到的胚狀體，接種到不定芽誘導培養基上培養，25～30℃下暗培養，胚狀體開始逐漸變綠，發生毛狀體，培養90d后，萌發形成無根不定芽叢；所述不定芽誘導培養基是以MS培養基為基本培養基，并添加6-BA 1.0mg/L、NAA 0.01mg/L、蔗糖30g/L、卡拉膠6.5g/L，pH 5.8；

4)、不定芽誘導生根

待不定芽伸長到2～3cm時，將不定芽叢進行單株分離，接種到生根培養基上，25～30℃下暗培養，培養40d后，在不定芽的基部形成棕色的根，根上有根毛，部分分叉；所述生根培養基是以1/2MS培養基為基本培養基，并添加NAA 1.0mg/L、IBA 0.5mg/L、蔗糖20g/L、卡拉膠6.5g/L，pH 5.8；

5)、移栽和管理過程

A.出瓶方法：將生根苗連瓶放置在控溫大棚中煉苗，一周后將苗移出培養瓶外，洗凈小苗根部的培養基，進行移栽；

B.基質制作：分別取草炭土、椰糠和河沙，按體積比計：草炭土：椰糠：河沙＝3～5：2～4：1的比例配成基質，提前澆透水，并覆蓋薄膜保濕；

C.移栽方法：將已經濕透的基質進行淺翻，然后耙平，并用竹棒打孔，孔深0.5cm，將小苗根部輕輕放到孔中，并用周圍的基質填充，稍壓實，并用噴霧的方法淋定根水；

D.管理方法：移栽后7～10d，覆蓋薄膜保濕，基質濕度保持80％～90％，然后逐漸降低到70％；空氣濕度保持90％以上，遮陰度60％～70％，然后逐漸減少到30％；15～20d后幼苗生新根，30d后可見新葉抽出，以后平均每20～25d抽生1片新葉，2年時株高20cm，葉片數40～50片時，自然開花；

E.施肥方法：15～20d后，晴天上午采用0.2％～0.3％尿素溶液噴霧后，并用清水淋洗，每7d施肥1次，半年后改為花多多9號，按說明施用；

F.病蟲害防治方法：利用500倍多菌靈、500倍百菌清、800倍甲霜靈復合防病，利用菊酯類殺蟲劑除蟲。